動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性法)
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞,使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
它具有以下優(yōu)點(diǎn):
1. 快速裂解,多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化,能快速使細(xì)胞裂解。
2. 非變性(80807A)產(chǎn)品能程度地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,還可以用于蛋白活性檢測(信號(hào)傳遞研究和酶動(dòng)力學(xué)檢測)和 Western Blot 等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3. 變性(80807B)裂解細(xì)胞的效率更高,主要用于對(duì)抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),還可以用于 Western Blotting。
4. 適用于培養(yǎng)細(xì)胞(包括懸浮細(xì)胞)和新鮮組織。
動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性法)
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào)塑料瓶包裝塑料瓶包裝
動(dòng)物細(xì)胞裂解液(非變性) 80807A 250 mL -
動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性) 80807B - 250 mL
使用手冊(cè) 80807sc 1 份 1 份
動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性法)運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸、4℃保存,有效期一年。
自備試劑 PBS 緩沖液
使用方法 注意事項(xiàng)
1、 如果在本產(chǎn)品中額外再加入終濃度為 1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復(fù)
合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2、 如果用于信號(hào)傳遞研究,在本產(chǎn)品中加入終濃度為 1×的、新鮮配制
的磷酸酶抑制劑復(fù)合物。
3、 整個(gè)裂解步驟都要在冰浴或 4℃操作。本產(chǎn)品和 PBS 均需預(yù)先冷卻。
4、 本產(chǎn)品所含有較高濃度的去垢劑會(huì)對(duì) Bradford 蛋白濃度測定有較大影
響,因此只能使用 BC
3、 按每 106個(gè)細(xì)胞加入 0.1 mL 本產(chǎn)品(或 100mm 貼壁細(xì)胞加 1mL 本產(chǎn)
品)的比例向培養(yǎng)板中加入適量的本產(chǎn)品(按此比例裂解得到的裂解物
的蛋白濃度約在 5-10 mg/mL 之間)。
注意:裂解效率跟細(xì)胞數(shù)量和本產(chǎn)品用量的比例密切相關(guān)。一般情況下 6
孔板的單孔(1~2×106細(xì)胞)需要 0.1~0.2 mL 本產(chǎn)品;25 cm2培養(yǎng)瓶
(3~6×106 細(xì)胞)需要 0.3~0.6 mL;75 cm2 培養(yǎng)瓶(1~2×107 細(xì)胞)
需要 1~2 mL。對(duì)于特別大或特別小的細(xì)胞,需要用戶摸索用量。
4、 冰上放置 10-30 分鐘(時(shí)間跟細(xì)胞系相關(guān)),其間偶爾輕輕搖晃或用
槍頭輕輕吹打。
5、 將細(xì)胞培養(yǎng)板傾斜使上清液匯集在一端,并將其全部轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5
mL 塑料離心管中。
6、 15,000×g,4℃離心 10 分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料離
心管中,放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,
新鮮使用。
7、 使用前先測定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western
或免疫沉淀操作。
二:處理懸浮細(xì)胞
1、 400×g,4℃離心 10 分鐘收集懸浮細(xì)胞,棄上清。
2、 用等體積的預(yù)冷 PBS 洗滌細(xì)胞沉淀兩遍,步驟同步。
3、 按每 106個(gè)細(xì)胞加入 0.1 mL 本產(chǎn)品的比例加入本產(chǎn)品,充分懸浮細(xì)胞。
4、 冰上放置 15 分鐘裂解細(xì)胞,期間偶爾輕柔震蕩。
5、 15,000×g,4℃離心 10 分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料離
心管中。為避免吸取到細(xì)胞沉淀,留 20-40uL 液體不取。
6、 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,
新鮮使用。
7、 使用前先測定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western
或免疫沉淀操作。
三:處理組織塊
1、 稱量組織塊,用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿,用 5-10 倍體積的、預(yù)冷的 PBS 洗兩次(包括沖洗器材)。
2、 將勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管中,1500g、4℃離心 5 分鐘后棄上清。
3、 按每 50 mg 組織加入 0.2 mL 本產(chǎn)品的比例加入預(yù)冷的本產(chǎn)品,吹打混勻,放置冰上。
4、 每隔 5 分鐘振蕩器輕柔振蕩一次,共 4 次。
5、 15,000×g、4℃離心 10 分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料心管中,放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鮮使用。
6、 使用前先測定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。
關(guān)鍵字: 動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性法)廠家;動(dòng)物細(xì)胞裂解液(變性法)現(xiàn)貨
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾#⒃诒本?、廣東,江西,吉林等全國30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。