???iTRAQ

? ???iTRAQ的4種同位素標記試劑由４種相對分子質(zhì)量分別為114、115、116和117的報告基團(reportergroup)，相對分子質(zhì)量分別為31、30、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(balancegroup)以及一個相同的肽反應標記試劑基團(peptide reactivegroup)組成。不同的報告基團分別與相應的平衡基團相配后，相對分子質(zhì)量均為145，即等量異位標簽(isobaric tag)。
? ? ?將蛋白質(zhì)裂解為肽段，然后用iTRAQ試劑進行差異標記。由于iTRAQ試劑是等量的，即不同同位素在標記同一多肽后在級質(zhì)譜檢測，分子量完全相同，用串聯(lián)質(zhì)譜方法對在級質(zhì)譜檢測到前體離子(precursorion)進行碰撞誘導解離，產(chǎn)物離子通過第二級質(zhì)譜進行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中，報告基團、質(zhì)量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，質(zhì)量平衡基團丟失，產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報告離子。由于二級質(zhì)譜可分析相對分子質(zhì)量相差1的報告基團，不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度。同時，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂，形成一系列b離子和y 離子，得到離子片段的質(zhì)量數(shù)，通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較，可以鑒定出相應的蛋白質(zhì)前體.

技術(shù)特點:
1．可同時標記2~8 個樣本。
2.?iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標記修飾后的氨基酸，因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質(zhì)量較低(113~121)，低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準確的區(qū)域，因此質(zhì)譜檢測更為靈敏可靠。

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