產(chǎn) 品 說(shuō) 明

中文名稱：鈣黃綠素-AM
英文名稱：Calcein-AM
產(chǎn)品貨號(hào)：C-4041
產(chǎn)品規(guī)格：1 mg
應(yīng)用范圍：細(xì)胞熒光染料

產(chǎn)品參數(shù)
外觀：可溶于DMSO的無(wú)色固體
λEx/λEm (calcein) = 494/517 nm (pH 8)
貯存條件：-20℃ 避光保存
保質(zhì)期：12個(gè)月
分子式：C46H46N2O23
分子量：995
分子結(jié)構(gòu)圖：

產(chǎn)品介紹
Calcein-AM是一種對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的
細(xì)胞染色試劑，它可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，被細(xì)
胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，
發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF, AM
和CFDA）相比，Calcein-AM的細(xì)胞毒性很低。
Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為490 nm和515 nm。

產(chǎn)品介紹
Calcein-AM僅對(duì)活細(xì)胞染色。作為核染色染料的PI
不能穿過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此PI僅對(duì)死細(xì)胞染色。PI穿
過(guò)死細(xì)胞膜的無(wú)序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA
雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（激發(fā)：535 nm，發(fā)射：617
nm）。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此
可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用545 nm激發(fā)，
僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn)，Calcein-AM和PI經(jīng)常
被結(jié)合用來(lái)作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。由于不同細(xì)胞
系的染色條件不同，我們建議根據(jù)實(shí)際情況分別確定
Calcein-AM和PI的合適濃度。

使用方法
1、用DMSO制備1 mM 的Calcein-AM溶液，并用PBS將
其稀釋制成1～50 μM的Calcein-AM溶液。
2、染色HeLa細(xì)胞等貼壁細(xì)胞時(shí)，先用Trypsin-EDTA等
消化細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液。
3、將細(xì)胞懸液離心3分鐘 (1000 rpm)。
4、去除上清液，加入PBS緩沖液，細(xì)胞數(shù)量調(diào)整至105-
106/ml，再用移液器充分混勻。
注：由于培養(yǎng)基中的血清等含有酯酶，會(huì)分解
Calcein-AM，導(dǎo)致空白背景數(shù)值上升，所以需要離心數(shù)
次，用PBS洗滌數(shù)次直到完全洗凈。
5、將200 μL細(xì)胞懸液移至小試管中，加入100 μL染色
溶液，在37℃下孵育15分鐘。
6、 在蓋玻片上滴加適量的染色的細(xì)胞溶液。用490 nm
激發(fā)波長(zhǎng)，515 nm發(fā)射波長(zhǎng)濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
1）如果Calcein-AM很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，
如Pluronic F127。
2） 可以用1/10濃度的Calcein-AM溶液代替培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)
1、Calcein-AM的酯鍵遇到濕氣會(huì)分解，使用后請(qǐng)?jiān)?br>-20℃下密閉冷凍保存，防止水分進(jìn)入。
2、Calcein-AM儲(chǔ)備液用緩沖液或培養(yǎng)基等稀釋時(shí)盡
量現(xiàn)配現(xiàn)用。


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