細(xì)菌細(xì)胞總蛋白提取試劑盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit)
規(guī)格 50T
存儲 Store at 4℃ (本試劑在室溫干燥條件下，可保存6 個月。溶菌酶貯存液、100×蛋白酶抑制劑和50%甘油2-8℃保存)
 
試劑盒組成
細(xì)菌細(xì)胞蛋白裂解液 50ml
細(xì)菌細(xì)胞漂洗液 120ml
溶菌酶貯存液 3ml
100×蛋白酶抑制劑 0.6ml
50% 甘油 10ml
說明書 1份

產(chǎn)品簡介 

1、 總論：經(jīng)典的細(xì)胞蛋白質(zhì)分離流程由下述主要步驟組成：清洗組織或細(xì)胞；裂解細(xì)胞；離心去沉淀獲得可溶性蛋白質(zhì)粗提物（可依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化特性特別的調(diào)配裂解緩沖液）； 通過有機(jī)溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進(jìn)一步純化，得到目的產(chǎn)物蛋白。

2、 本試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白的蛋白提取。本產(chǎn)品可應(yīng)用于從細(xì)菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行 IP，Western Blot，蛋白純化等下游操作。

使用說明 

1、離心收集細(xì)菌細(xì)胞, 按照每克濕菌取用 5-6ml 細(xì)菌細(xì)胞漂洗液的比例，于 20℃～37℃將細(xì)胞懸浮起來后，4℃，12000g，1-2min 離心除去細(xì)菌細(xì)胞漂洗液，漂洗2次。（離心只是收集細(xì)胞，轉(zhuǎn)速、時間可自行調(diào)整。）
>如果細(xì)菌細(xì)胞漂洗液不夠，也可以用 TE buffer（H=7.4 --7.6）代替。 
 
2、離心除去細(xì)菌細(xì)胞漂洗液后，按每克濕菌細(xì)胞，加入 5ml細(xì)菌細(xì)胞蛋白裂解液，250ul溶菌酶貯存液和50ul 100×蛋白酶抑制劑，混懸細(xì)菌細(xì)胞樣品。 
 
3、混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育 10～20 分鐘，同時輕輕搖動。
>若蛋白表達(dá)量較低，建議結(jié)合超聲粉碎，置冰上后，采用300w，10s 超聲/10s 間隔，超聲20min，至菌液變清或者變色。
>若目的蛋白不穩(wěn)定，可冰浴中孵育，且時間可以減少，裂解液內(nèi)加入 0.2 倍體積 50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。

4、細(xì)胞破碎后的勻漿液，根據(jù)您不同需要可以在10000g 離心10min到100000g 離心1h范圍離心。沉淀棄去。上清即為含有目的蛋白質(zhì)的粗提物。


注意事項 

若目的蛋白不穩(wěn)定，冰浴中孵育時間可以減少甚至取消，裂解液內(nèi)加入0.2 倍體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。

*請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項！

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