Karnovsky固定液是組織化學(xué)中最常用的混合型固定液之一,主要成分含能快速滲透的多聚甲醛和緩慢滲透的戊二醛。它能很好保存組織的抗原性和精細(xì)結(jié)構(gòu),故尤其適用于電鏡免疫化學(xué)樣品的固定。本產(chǎn)品是在Karnovsky原始配方的基礎(chǔ)上修改而得,它具有下列特點(diǎn):
1.既可用于灌注法固定,也可用于浸泡法固定。
2.滲透能力強(qiáng),固定均勻,組織收縮小,染色效果好。
3.適用范圍廣,可以用于固定從細(xì)菌、真菌,植物到動(dòng)物的各種生物材料。
4.對(duì)原始配方進(jìn)行了改良,不使用有毒的含砷化合物,減少了對(duì)操作者的毒害。
5.固定的組織經(jīng)過包埋切片等處理用既可用于光學(xué)顯微鏡檢測(cè),也可用于電子顯微鏡檢測(cè)。
操作步驟:
1.對(duì)動(dòng)物,最后先灌注固定,然后再浸泡固定10-30分鐘。對(duì)植物、真菌、細(xì)菌、病毒、原蟲等材料,直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2.固定后的組織洗滌后即可用于包埋、切片、染色、檢測(cè)等后續(xù)操作。
Karnovsky固定液固定時(shí)的注意事項(xiàng):
(1)固定液量:20倍于材料的體積,以免固定液被稀釋。
(2)選擇合適的固定液:滲透力強(qiáng)的固定液既可以迅速進(jìn)入組織中,又不使組織過度收縮或膨脹。
(3)固定的時(shí)間要合適:
與材料的大小和溫度有關(guān):材料大則時(shí)間長(zhǎng),材料小則時(shí)間短;溫度高則時(shí)間短,溫度低則時(shí)間長(zhǎng)。
經(jīng)固定的材料如不及時(shí)使用,可以經(jīng)過90%酒精換到70%酒精中各半小時(shí),再換入一次70%酒精,在0-4℃冰箱內(nèi)可保存半年。經(jīng)過較長(zhǎng)時(shí)間保存的材料進(jìn)行觀察前可以換新的固定液再處理一次,效果較好。
Karnovsky固定液固定的條件:
(1)迅速滲入組織,殺死原生質(zhì)。在殺死的短時(shí)期中,細(xì)胞形態(tài)不致有所變化。
(2)必須具有滲透力,對(duì)組織各部分的滲透力相等,可使組織內(nèi)外完全固定。
(3)盡可能避免使組織膨脹或收縮。
(4)使細(xì)胞內(nèi)的成分凝固或沉淀。
(5)增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度,易于鑒別。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使組織變硬,具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生質(zhì)以后,增加細(xì)胞對(duì)于各種穿透的抵抗力,不致于因以后的處理而使固定的原生質(zhì)變形。
存儲(chǔ)與運(yùn)輸:常溫運(yùn)輸,2-8℃冷藏保存。
有效期12個(gè)月。
Karnovsky Fixative are ready-to-use electron microscopy (EM) fixative solutions that use a combination of paraformaldehyde and glutaraldehyde, referred to as formal-glutaraldehyde (F-G) fixative solutions. This formal-glutaraldehyde mixture achieves rapid tissue penetration and optimal preservation and stabilization of cellular proteins. Karnovsky fixatives are useful in research applications and are especially good for nervous system specimens and when tissues are larger than normal for electron microscopy standards.
關(guān)鍵字: Karnovsky固定液
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