產(chǎn)品簡(jiǎn)介
常規(guī)的 Tris-SDS-PAGE 電泳的只能分辨大分子蛋白，對(duì)于相對(duì)分子量小的，尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。
本產(chǎn)品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠，方便、
快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1、10% PAGE 膠凝固劑配制后分裝-20℃保存。該溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換，使用-20℃保存的 10% PAGE 膠凝固劑。
2、在凝膠配制過(guò)程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
3、在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。
4、Acr/Bis 具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
5、本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或其它用途。
本產(chǎn)品所提供的 PAGE 膠凝固劑為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成 10% PAGE 膠凝固劑溶液（比如將0.5g
PAGE 膠凝固劑加 5ml 雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置 4℃保存兩周。
I 配制分離膠
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
2、加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約 4 ml ），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制夾層膠
去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2、加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
3、將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面（對(duì)于 1 mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約 1 ml ）， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠
去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
2、加入 10% PAGE 膠凝固劑和 PAGE 膠促凝劑，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
3、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
4、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
5、進(jìn)行電泳操作。
IV 電泳
將電泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入陽(yáng)極緩沖液，內(nèi)槽加入陰極緩沖液，30V 預(yù)電泳 10min，將樣品（已經(jīng)過(guò) Tricine 上樣緩沖液處理）加入點(diǎn)樣孔后 30V 電泳 1 小時(shí)，100V 電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳，進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。
配膠說(shuō)明：
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。
關(guān)鍵字： 凝膠制備試劑盒
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