瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

● 試劑盒內(nèi)容：

● 儲存條件：

本試劑盒在室溫（15–25℃）干燥條件下，可保存12個月；更長時間的保存可置于2–8℃。（注意：當(dāng)?shù)蜏刭A存時，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10-20分鐘，以平衡溶液溫度。）
 
● 產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和獨特的緩沖液系統(tǒng)，從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時去除蛋白質(zhì)、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。可回收100 bp–40 kb大小的片段，回收率大于80%（<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率為30－50 %）。
每個吸附柱每次最多可吸附的DNA量約為20 μg。
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。
 
● 產(chǎn)品特點：
1 溶膠液PN為亮黃色，便于觀察膠是否徹底融化和溶膠體系的pH是否合適。
2 操作快捷，單個樣品操作少于15分鐘。

注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

1 電泳時換用新鮮的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果；如有可能，盡量使用TAE系統(tǒng)，因為有研究指出使用TBE系統(tǒng)后，回收產(chǎn)物中的痕量硼酸會影響后續(xù)的酶切反應(yīng)。

2 切膠時，紫外照射時間應(yīng)盡量短，以免對DNA造成損傷；請盡量去除不含目的片段的瓊脂糖凝膠，這將會對融膠很有幫助。

3 次使用前請按照標(biāo)簽說明在漂洗液PW中加入無水乙醇，并做好標(biāo)記，用完后緊擰瓶蓋。

● 操作步驟：

如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1 將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量。

2 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PN （如果凝膠重為100mg，其體積可視為100 氀，則加入300 氀溶膠液），55℃水浴放置10分鐘，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。

注意：

1 如果此時溶膠液變?yōu)榉奂t色，請加入少量3M NaAc pH5.2（一般說來，10μl足矣），使溶膠液變?yōu)辄S色再上柱離心。

2 對于高濃度的凝膠（>2％），按照100mg凝膠加入100μl滅菌水和600μl溶膠液PN的比例加入溶膠液PN。

3 膠塊完全溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在較高溫度時結(jié)合DNA的能力較弱。

3 當(dāng)目的片段<500bp時，如想提高回收效率，向溶膠體系種加入1/3溶膠液PN體積的異丙醇（如使用300μl溶膠液，則加入100μl異丙醇），混勻，55℃溫浴1分鐘后再進行步驟4。當(dāng)目的片段>500bp時，省略此步驟，直接進行步驟4。

4 將上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2分鐘，13,000 rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

注意：

1 吸附柱CA1的有效容積為700μl，如溶膠體系體積大于700μl，分次上柱，保證全部溶液都加到吸附柱中。

2 <100bp和>10kb的片段請在室溫放置10分鐘，這將會提高回收效率。

5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），13,000 rpm離心60秒，倒掉廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW，13,000 rpm離心30-60秒，倒掉廢液。

7 將離心吸附柱CA1放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液。

注意：此步必不可少！如果漂洗液有殘留會影響回收效率和DNA質(zhì)量，進而影響下游實驗；離心后將吸附柱蓋子打開，室溫放置2分鐘，這樣將有助于徹底揮發(fā)殘余乙醇。

8 將吸附柱放到一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫緩沖液EB（一般不要少于30μl），室溫放置2分鐘。13,000 rpm離心1分鐘收集DNA溶液。

注意：

1可將洗脫緩沖液EB預(yù)熱到70℃后再加到吸附膜上，這樣可以提高洗脫效率。

2 CA1柱的洗脫體積不應(yīng)少于30 μl，體積過小將會降低回收效率。

3洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率

9 DNA產(chǎn)物-20℃保存。