產(chǎn) 品 說(shuō) 明

中文名稱：5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
英文名稱：5(6)-CFDA, SE
產(chǎn)品貨號(hào)：C-4037-1
產(chǎn)品規(guī)格：25 mg
應(yīng)用范圍：熒光標(biāo)記試劑

產(chǎn)品參數(shù)
外觀：可溶于DMSO的白色或淺黃色固體
λEx/λEm = 494/521 nm
貯存條件：4℃避光保存
保質(zhì)期：12個(gè)月
分子式：C29H19NO11
分子量：557.47
分子結(jié)構(gòu)圖：


產(chǎn)品介紹
5(6)-CFDA, SE是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記
的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，
還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過(guò)程。
5(6)-CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein
diacetate，F(xiàn)DA）的衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，
本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過(guò)被動(dòng)運(yùn)輸穿透細(xì)胞
膜進(jìn)入活細(xì)胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基
熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein
succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，
不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可
CFSE還可自發(fā)并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)
到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時(shí)過(guò)量且未被偶聯(lián)的5(6)-CFDA,
SE通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟
所清除。經(jīng)5(6)-CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常
穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群
落分析。
5(6)-CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前
使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的
子代細(xì)胞的熒光分配也很均一。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，
CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度
變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過(guò)流式細(xì)胞儀（FL1通道）根據(jù)
熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2
的熒光強(qiáng)度），二次（1/4的熒光強(qiáng)度），三次（1/8的
熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。5(6)-CFDA, SE
可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)5(6)-CFDA, SE標(biāo)
記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近
細(xì)胞染色的功能。5(6)-CFDA, SE最常用于淋巴細(xì)胞的增
殖檢測(cè)，也可用于成纖維細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，造血祖
細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測(cè)。
5(6)-CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，除了流式細(xì)胞
儀檢測(cè)細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，
或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

使用方法（針對(duì)活細(xì)胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實(shí)際情
況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整）
1、用DMSO制備1 mM的5(6)-CFDA, SE溶液。用PBS或
適當(dāng)?shù)木彌_液將其稀釋成10～50 μM的5(6)-CFDA, SE溶液。
2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，用適當(dāng)藥物處理細(xì)胞。
3、離心收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1～5×105個(gè)/管。
4、用500 μL的5(6)-CFDA, SE工作液懸浮細(xì)胞，于室溫
或37℃避光孵育10-30分鐘。
5、吸除5(6)-CFDA, SE 染液，用PBS或其他合適緩沖液清洗
細(xì)胞，用500 μL預(yù)熱PBS或培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞。
6、用流式細(xì)胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注意事項(xiàng)
1、熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減
緩熒光淬滅。
2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套
操作。

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