根皮素脂質(zhì)體，納米包裹根皮素，水溶性根皮素，根皮素納米乳

Liposomal Phloretin,Water Soluble Phloretin,NanoActive Phloretin, Phloretin NanoEmulsion

【中文名稱】：根皮素

【英文名稱】：Phloretin

【CAS號】：60-82-2

根皮素是一種具有抗菌、抗炎作用的天然查爾酮。本研究探討了根皮素對丙酸桿菌所致皮膚感染的抗痤瘡活性及潛在的靶蛋白的抗炎抗菌作用。根皮素能有效地抑制人角質(zhì)形成細胞中的丙酸桿菌和丙酸桿菌誘導(dǎo)的toll樣受體（tlr）2介導(dǎo)的炎癥信號傳導(dǎo)。分泌型胚胎堿性磷酸酶檢測證實，根皮素的抗炎活性與丙酸桿菌刺激的TLR2介導(dǎo)的NF-B信號通路有關(guān)。根皮素顯著降低磷酸化c-jun N末端激酶（JNK）的水平，顯示1.184 × 10-5/m的結(jié)合親和力。我們還發(fā)現(xiàn)，根皮素與參與脂肪酸合成的丙酸桿菌-酮酰基載體蛋白（acp）合酶III（kas III）的微極性結(jié)合。構(gòu)象敏感的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示根皮素降低KASⅢ介導(dǎo)的3-酮?；?ACP產(chǎn)量超過66%。一項對接研究表明，根皮素與JNK1和KAS III的活性位點相互作用，表明它們參與了鏈霉菌誘導(dǎo)的炎癥，并可能成為根皮素抗菌活性的靶點。這些結(jié)果表明，根皮素可能有助于預(yù)防或治療痤瘡感染。

1.引言

類黃酮是最豐富的天然食品，如蔬菜、水果、香料、堅果、紅酒和茶。這一大類次生植物代謝產(chǎn)物包括6000多種已知化合物，具有許多生物和藥理作用，包括抗炎、抗過敏、抗腫瘤、抗菌、抗病毒和抗氧化活性。膳食多酚因其在疾病預(yù)防中的潛在應(yīng)用而受到廣泛研究。根皮素[3-（4-羥基苯基）-1-（2,4,6-三羥基苯基）-1-丙酮]是一種二氫查爾酮，主要存在于蘋果和草莓中，呈游離和糖苷形式，已知具有抗氧化、抗癌、抗炎和抗菌活性。

尋常痤瘡是皮脂腺單位最常見的皮膚疾病，以炎癥和非炎癥性病變?yōu)樘卣?，主要發(fā)生在面部、頸部和胸部皮膚，是由厭氧革蘭氏陽性丙酸桿菌感染所致。（根據(jù)分類分類，最近更名為表皮細菌丙酸桿菌（c.acnes）。尋常痤瘡病變包括丘疹、粉刺、結(jié)節(jié)和囊腫。對痤瘡炎癥的免疫應(yīng)答在尋常痤瘡發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。許多類型的藥物被用于治療這種疾病，包括外用藥物、口服抗生素和口服激素療法。最近，由于對現(xiàn)有抗生素的抵抗力和副作用的增加，公眾對天然產(chǎn)品治療痤瘡的興趣大大增加。丙酸桿菌通過誘導(dǎo)單核細胞產(chǎn)生促炎性細胞因子，如腫瘤壞死因子（TNF）-、白細胞介素（IL-1）和IL-8，促進痤瘡的炎癥性質(zhì)。據(jù)報道，痤瘡丙酸桿菌能激活toll樣受體（tlr）2，從而介導(dǎo)痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)的原代人單核細胞產(chǎn)生IL-12和IL-8，或巨噬細胞產(chǎn)生IL-6。

暴露于痤瘡刺激角質(zhì)形成細胞單層產(chǎn)生IL-1、TNF和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子。據(jù)報道，根皮素的抗痤瘡作用包括在痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)的炎癥信號上調(diào)過程中，環(huán)氧合酶2和前列腺素E2的表達減弱。在我們之前的研究中，研究了根皮素對PAM3cys-Ser-（Lys）4（PAM3CSK4）刺激的人胚胎腎（HEK）293-HTLR2細胞的影響。研究結(jié)果證實，根皮素對TLR2/1異二聚化的抑制作用與已知的TLR2抑制劑cu-cpt22的抑制作用相當。Western blotting結(jié)果表明，根皮素能有效抑制PAM3CSK4誘導(dǎo)的TLR2和NF-B p65表達，并與TLR2–TLR1界面結(jié)合。然而，有關(guān)根皮素對痤瘡炎癥作用的具體機制和靶蛋白尚未闡明。

在這個研究中，我們調(diào)查了根皮素對于不同菌株的丙酸桿菌產(chǎn)生的抗炎作用。我們還研究了根皮素對分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）測定、Western印跡和構(gòu)象敏感的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）抑制痤瘡引起的炎癥的靶蛋白的抑制作用，并對其進行了研究。利用熒光猝滅和分子對接分析，菲洛丁與靶蛋白之間的相互作用。我們的研究結(jié)果為根皮素作為一種新型有效的抗痤瘡藥物的潛在應(yīng)用提供了依據(jù)。

2.結(jié)果

2.1  抗菌活性

我們評估了與作為陽性對照的三氯生和過氧化苯甲酰相比，根皮素對革蘭氏陰性和陽性菌株的抗菌活性。三氯生是一種著名的抗菌和抗真菌劑，用于商業(yè)產(chǎn)品，如洗發(fā)水和牙膏。美國食品藥品監(jiān)督管理局最近禁止將其用于抗菌產(chǎn)品，如肥皂。過氧化苯甲酰是一種局部痤瘡劑，可引起皮膚反應(yīng)，如干燥、瘙癢和刺激；因此，許多研究集中在尋找這種潛在危險化合物的替代品。根皮素對標準革蘭陰性和陽性菌株的抗菌活性較低（表1）。三氯生對革蘭氏陰性和陽性標準菌株有很強的抑制作用，MIC值在0.5-1 m之間，而過氧化苯甲酰則有很強的抑制作用。未對任何試驗菌株產(chǎn)生抗菌作用。

我們評估了根皮素對四種不同種類的丙酸桿菌菌株的活性，發(fā)現(xiàn)它對丙酸桿菌菌株KCTC3220、KCTC5527和KCTC5933（MIC=16 m）具有有效作用，對KCTC3114菌株的作用較弱（MIC =32 m）。三氯生對所有四種毒株都有很強的抑制作用（MIC=8或16 m），而過氧化苯甲酰的抑制作用則要小得多（MIC=64 m）。這些結(jié)果表明，根皮素對痤瘡有很強的選擇性抗菌活性，對根皮素的抗菌活性強于標準的抗痤瘡劑過氧化苯甲酰，表明根皮素可作為抗痤瘡劑使用。

2.2  哺乳動物細胞毒性

我們使用細胞計數(shù)試劑盒8（CCK-8）研究了根皮素對HACAT人角質(zhì)形成細胞和人腎胚胎（HEK）293細胞的細胞毒性。用50 M的phloretin處理未改變hacat細胞的活力。在HEK293細胞中，濃度超過25 m時活力變化很小，但劑量-反應(yīng)曲線顯示，在兩種細胞類型中，phloretin的半抑制濃度（IC50）值均大于50 m。三氯生對細胞有很強的毒性，即使在非常低的濃度下，Hacat細胞的IC50值為18M。

3.結(jié)論

與廣泛使用的抗痤瘡劑過氧化苯甲酰相比，根皮素對痤瘡菌株的活性更強。在這項研究中作為陽性對照的三氯生，由于其細胞毒性現(xiàn)在被禁止在肥皂中使用，盡管它以前是許多清潔和化妝品中常用的抗菌成分。最近一項對小鼠的研究表明，三氯生削弱了心肌和骨骼肌的收縮力。我們發(fā)現(xiàn)，三氯生和過氧化苯甲酰對人Hacat細胞和Hek293細胞都有毒性，而50 μM根皮素對細胞活力沒有顯著影響。因此，在消費品中，根皮素可以作為三氯生的天然有效替代品。