??????碧云天的G6P檢測試劑盒(WST-8法) (G6P Assay Kit with WST-8)是一種高靈敏度的基于WST-8的顯色反應,通過比色法來檢測細胞、組織或其它樣品中G6P含量的檢測試劑盒。 ??????WST-8是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其他MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先,MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液來溶解;而WST-8和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定,使實驗結果更加穩(wěn)定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高。WST-8和WST-1相比,檢測靈敏度更高,更易溶解,并且更加穩(wěn)定。 ??????本試劑盒使用便捷。使用細胞、組織等的裂解液即可進行檢測,無需分離純化細胞、組織或其它樣品中的G6P。 ??????本試劑盒檢測靈敏度高,線性范圍寬。可以檢測含量低至20μM (1nmol)的G6P,在20μM (1nmol)至500μM (25nmol)之間呈現良好的線性關系。 ??????G6P (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又稱6-磷酸葡萄糖)是葡萄糖的第6位碳上的羥基在己糖激酶催化下發(fā)生磷酸化后生成的分子,是細胞中常見的糖代謝小分子,參與糖酵解(glycolytic pathway)和磷酸戊糖(pentose phosphate pathway)等生化途徑。在糖酵解的步反應中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其個底物,該過程也是生成NADPH的主要途徑。除了這兩個代謝途徑外,葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被存儲起來。 ??????本試劑盒可檢測樣品中的G6P含量,具體原理如下:葡萄糖-6-磷酸(G6P)在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸內酯(6-phosphogluconate, 6-PG),在這一反應過程中NADP+被還原為NADPH,生成的NADPH在電子耦合試劑1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下將WST-8還原生成橙黃色的formazan,在450nm左右有吸收峰。反應體系中生成的formazan與樣品中總的G6P的量呈正比關系。WST-8法檢測G6P的原理參考圖1。
??????本試劑盒適用于檢測細胞、組織以及其它適當樣品中G6P的含量。 ??????本試劑盒可以測定100個樣品。
保存條件: ??????-20℃保存,一年有效。顯色液(S0185-3)須-20℃避光保存。 注意事項: ??????經檢測本試劑盒中的酶混合液室溫存放72小時或反復凍融5次不影響其酶活性。 ??????由于G6P提取液略顯粘稠,以該提取液作為稀釋液時,無論對標準品還是樣品進行稀釋,在稀釋過程中務必確保稀釋均勻,否則易造成實驗數據產生較大波動。 ??????在樣品加樣和混勻過程中,須盡量避免產生氣泡,以免影響最終的吸光度測定。 ??????如果不能非常嚴格地控制反應溫度和反應時間,每次檢測都需要設置標準曲線。 ??????如果樣品溶液中G6P濃度過高或過低,不在試劑盒的線性檢測范圍內時,可適當調整樣品或者提取液的用量。 ??????盡量使用新鮮樣品進行檢測,凍存或反復凍融的細胞或組織樣品可能對結果有一定影響。 ??????本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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