?????? pCMV-N-mCherry是碧云天自行研發(fā)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)N端含mCherry (DsRed的突變體，一種非常明亮的紅色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)mCherry的完整編碼序列，因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有mCherry標(biāo)簽的融合蛋白。利用mCherry的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位，也可以利用mCherry抗體來(lái)檢測(cè)或免疫沉淀融合蛋白。mCherry與GFP沒(méi)有序列同源性，不能使用GFP抗體檢測(cè)mCherry。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可以使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
??????pCMV-N-mCherry質(zhì)粒的主要信息如下：

?????? pCMV-N-mCherry質(zhì)粒(4994bp)的圖譜如下：

??????pCMV-N-mCherry的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

??????pCMV-N-mCherry中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)包括：

??????pCMV-N-mCherry中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pCMV-N-mCherry once)包括：

??????pCMV-N-mCherry質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
??????N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
??????T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
??????pCMV-N-mCherry的全序列信息：D2711 pCMV-N-mCherry-seq.txt
??????pCMV-N-mCherry質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請(qǐng)參考圖1。

圖1. pCMV-N-mCherry質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果圖。左側(cè)為明場(chǎng)照片，右側(cè)為熒光照片。

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