??????碧云天的Protein A Agarose (Fast Flow)預(yù)裝柱(Protein A Agarose Prepacked Column, Fast Flow)是一種簡(jiǎn)便、快速、高效的用于抗體純化、免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)的即用型預(yù)裝柱，也稱層析柱(Chromatography column)或純化柱(Purification column)。本產(chǎn)品也可用于實(shí)驗(yàn)中抗原抗體復(fù)合物的分離純化。 ??????Protein A是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細(xì)胞壁表面蛋白，分子量為42kDa；Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達(dá)的免疫球蛋白結(jié)合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特異性地與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)結(jié)合，結(jié)合的部位通常為免疫球蛋白的Fc區(qū)，但有資料顯示Protein A也會(huì)和人VH3家族的Fab區(qū)結(jié)合，而Protein?G有時(shí)與Fab區(qū)也有一定結(jié)合。同時(shí)，兩者對(duì)于不同的免疫球蛋白亞類的結(jié)合能力有所不同。適當(dāng)重組改造的Protein A、G與瓊脂糖凝膠(agarose)以一定的方式結(jié)合，可用于免疫沉淀或抗體的純化。 ??????使用本品經(jīng)過(guò)一步親和層析，即可從樣品中得到高純度的抗體，應(yīng)用廣泛。本產(chǎn)品為即用型預(yù)裝柱，適合于培養(yǎng)液、血清、腹水或雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IgG的純化，或含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。Protein A Agarose適合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b及rabbit IgG等。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose產(chǎn)品與人、小鼠、大鼠常見(jiàn)的免疫球蛋白亞類的結(jié)合能力及不同物種的總結(jié)合能力情況表。
??????本預(yù)裝柱中使用的Protein A為重組蛋白，特異性強(qiáng)。本產(chǎn)品中的重組Protein A可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端特異性結(jié)合，分子量為34.8kDa。該重組Protein A通過(guò)改造，僅保留了與IgG Fc端結(jié)合相關(guān)的氨基酸序列，去除了結(jié)合位點(diǎn)以外可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合的序列，從而可以有效減少非特異性結(jié)合。每個(gè)Protein A分子可以結(jié)合5個(gè)IgG分子。 ??????本預(yù)裝柱中的瓊脂糖物理化學(xué)穩(wěn)定，有相對(duì)較高的線性流速。本產(chǎn)品中的Protein A共價(jià)連接到4%的高交聯(lián)度、高流速瓊脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上。每毫升Protein A agarose beads (沉淀物)中共偶聯(lián)有約4mg的重組Protein A。每毫升Protein A agarose beads (沉淀物)可以結(jié)合約30-50mg human IgG。本產(chǎn)品中agarose beads的平均直徑為90μm，蛋白純化時(shí)的推薦線性流速為50-400cm/h，耐壓指數(shù)為0.008MPa。 ??????本預(yù)裝柱可重復(fù)次數(shù)多。本預(yù)裝柱再生后，重復(fù)使用10次幾乎不影響其結(jié)合能力。 ??????本預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，使用方便。本類型的預(yù)裝柱為高純度聚丙烯柱體，低吸附，規(guī)格有1ml和5ml兩種，魯爾接口，可適配商品化的各類中壓液相純化系統(tǒng)，如?KTA系統(tǒng)(也被稱為AKTA系統(tǒng))等；如果使用注射器或蠕動(dòng)泵，需要相應(yīng)的接頭進(jìn)行連接，否則容易出現(xiàn)預(yù)裝柱內(nèi)部壓力過(guò)高而導(dǎo)致推不動(dòng)甚至漏液的情況，如果沒(méi)有相應(yīng)的接頭，不推薦連接注射器或蠕動(dòng)泵使用。 ??????本類型的預(yù)裝柱有1ml和5ml兩種，相應(yīng)的體積為Protein A Agarose在預(yù)裝柱中壓實(shí)后的體積，并保存在20%乙醇溶液中。 包裝清單：
保存條件： ??????4℃保存，一年有效。請(qǐng)勿冷凍。 注意事項(xiàng)：? ??????請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。 ??????包裝中的下堵頭請(qǐng)保存好，用于預(yù)裝柱再生后的密封。 ??????從蛋白樣品收集開(kāi)始，所有步驟中蛋白樣品都必須在4℃或冰上操作。 ??????請(qǐng)按照IgG結(jié)合量的80%以內(nèi)準(zhǔn)備樣品，抗體純化效果更佳。一般血清的總IgG含量在10-15mg/ml。細(xì)胞培養(yǎng)上清中的抗體濃度與雜交瘤克隆密切相關(guān)，胎牛血清(FBS)中的抗體也同時(shí)會(huì)被純化。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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