??????碧云天的Protein A+G Agarose (Fast Flow)預裝柱(Protein A Agarose Prepacked Column, Fast Flow)是一種簡便、快速、高效的用于抗體純化、免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)的即用型預裝柱,也稱層析柱(Chromatography column)或純化柱(Purification column)。本產(chǎn)品也可用于實驗中抗原抗體復合物的分離純化。 ??????Protein A是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細胞壁表面蛋白,分子量為42kDa;Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達的免疫球蛋白結合蛋白。Protein A和Protein G功能相似,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)結合,結合的部位通常為免疫球蛋白的Fc區(qū),但有資料顯示Protein A也會和人VH3家族的Fab區(qū)結合,而Protein?G有時與Fab區(qū)也有一定結合。同時,兩者對于不同的免疫球蛋白亞類的結合能力有所不同。適當重組改造的Protein A、G與瓊脂糖凝膠(agarose)以一定的方式結合,可用于免疫沉淀或抗體的純化。 ??????使用本品經(jīng)過一步親和層析,即可從樣品中得到高純度的抗體,應用廣泛。本產(chǎn)品為即用型預裝柱,適合于培養(yǎng)液、血清、腹水或雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中的IgG的純化,或含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。Protein A+G Agarose適合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose單獨可以免疫沉淀的抗體,包括human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,rabbit IgG,rabbit、goat多克隆抗體。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose產(chǎn)品與人、小鼠、大鼠常見的免疫球蛋白亞類的結合能力及不同物種的總結合能力情況表。
??????本預裝柱中使用的Protein A和Protein G為重組蛋白,特異性強。本產(chǎn)品中的重組Protein A和Protein G可與多數(shù)哺乳動物IgG的Fc端特異性結合,分子量分別為34.8kDa和22.5KDa。該重組Protein A和Protein G通過改造,僅保留了與IgG Fc端結合相關的氨基酸序列,去除了結合位點以外可能導致非特異性結合的序列,從而可以有效減少非特異性結合。每個Protein A分子和Protein G分子可分別結合5個和2個IgG分子。 ??????本預裝柱中的瓊脂糖物理化學穩(wěn)定,有相對較高的線性流速。本產(chǎn)品中的Protein A和Protein G共價連接到4%的高交聯(lián)度、高流速瓊脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上,并按1:1比例混合。每毫升Protein A+G agarose beads (沉淀物)中共偶聯(lián)有約4mg的重組Protein A和Protein G。每毫升Protein A+G agarose beads (沉淀物)可以結合約18-50mg human IgG。本產(chǎn)品中agarose beads的平均直徑為90μm,蛋白純化時的推薦線性流速為50-400cm/h,耐壓指數(shù)為0.008MPa。 ??????本預裝柱可重復次數(shù)多。本預裝柱再生后,重復使用10次幾乎不影響其結合能力。 ??????本預裝柱具有標準接口,使用方便。本類型的預裝柱為高純度聚丙烯柱體,低吸附,規(guī)格有1ml和5ml兩種,魯爾接口,可適配商品化的各類中壓液相純化系統(tǒng),如?KTA系統(tǒng)(也被稱為AKTA系統(tǒng))等;如果使用注射器或蠕動泵,需要相應的接頭進行連接,否則容易出現(xiàn)預裝柱內(nèi)部壓力過高而導致推不動甚至漏液的情況,如果沒有相應的接頭,不推薦連接注射器或蠕動泵使用。 ??????本類型的預裝柱有1ml和5ml兩種,相應的體積為Protein A+G Agarose在預裝柱中壓實后的體積,并保存在20%乙醇溶液中。 包裝清單:
保存條件: ??????4℃保存,一年有效。請勿冷凍。 注意事項:? ??????請勿冷凍保存本產(chǎn)品。 ??????包裝中的下堵頭請保存好,用于預裝柱再生后的密封。 ??????從蛋白樣品收集開始,所有步驟中蛋白樣品都必須在4℃或冰上操作。 ??????請按照IgG結合量的80%以內(nèi)準備樣品,抗體純化效果更佳。一般血清的總IgG含量在10-15mg/ml。細胞培養(yǎng)上清中的抗體濃度與雜交瘤克隆密切相關,胎牛血清(FBS)中的抗體也同時會被純化。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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