產(chǎn)品描述
 

植物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進行PCR擴增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強。試劑盒采用獨特的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產(chǎn)物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應(yīng)。此外，樣品使用量少，低至1 mg植物葉片即可進行實驗。

本試劑盒中提供的2× Plant Master Mix具有很強的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因植株鑒定、植物基因分型等。

產(chǎn)品組分
 

a）6× DNA Loading buffer：不含SDS。

b）2× Plant Master Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl₂、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。

運輸方法
 

冰袋運輸。

保存方法
 

1. 試劑10183-A【Buffer P1】，在常溫干燥條件下，可保存12個月，如需保存更長時間可置于4℃。低溫保存，易出現(xiàn)沉淀，可平衡至室溫或37℃水浴10 min，待沉淀溶解后，混勻使用。

2. 試劑10183-B【Buffer P2】，中和裂解產(chǎn)物，使其不影響后續(xù) PCR 反應(yīng)。保存條件與Buffer P1一樣。
3. 試劑10183-C【6× DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃長期保存。

4. 試劑10183-D【2× Plant Master Mix】，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。如果環(huán)境溫度過高，2× Plant Master Mix 可能會變渾濁，可置于冰上放置1-2 min，待溶液澄清，上下顛倒混勻3-5次后再使用。

操作方法
 

本試劑盒根據(jù)不同實驗需求提供了兩種操作方法。直接法僅需要將一小片植物組織加入PCR反應(yīng)體系即可；裂解法則是將少量含有植物組織的裂解產(chǎn)物加入PCR反應(yīng)體系。其中，裂解法適合目的片段較長，擴增難度較大，以及需要對同一樣本進行多次PCR擴增的實驗。

裂解法

1. 取3-5 mg葉片（直徑5-7 mm）組織，置于200 μL或1.5 mL離心管中。

注：切勿加入過量葉片組織，以便酶解反應(yīng)更順利進行。

2. 在離心管中加入50 μL Buffer P1，確保裂解液能夠完全浸沒葉片組織。

3. 蓋好離心管蓋，95℃處理10 min。

注：加熱后，若管壁上液體較多，可進行短暫瞬時離心。

4. 加入50 μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者渦旋混勻。

5. 所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃長期保存或直接用于PCR擴增。

直接法

1. 在200 μL離心管中加入相應(yīng)的2× Plant Master Mix，再添加對應(yīng)的引物，并用ddH₂O使其稀釋1×（PCR體系配置見下表）

2. 剪取1-2 mg葉片碎塊（直徑2-3 mm）加入配置好的1×PCR反應(yīng)體系。

注：確保葉片碎塊完全被PCR反應(yīng)液浸沒，切勿加入過量組織葉片。

3. 根據(jù)優(yōu)化好的PCR條件（退火溫度等）進行PCR反應(yīng)。

4. 瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果。

注：建議使用試劑盒提供的6× DNA Loading Buffer，切勿使用含有SDS的Loading Buffer進行電泳。