化學(xué)名

4-[6-methoxy-7-(3-piperidin-1-ylpropoxy)quinazolin-4-yl]-N-(4-propan-2-yloxyphenyl)piperazine-1-carboxamide

簡(jiǎn)稱

Tandutinib

別名

MLN518, MLN-518, MLN 518, CT 53518, CT-53518, CT53518

中文名

坦度替尼

化學(xué)式

C₃₁H₄₂N₆O₄

分子量

562.7

CAS號(hào)

387867-13-2

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO25mg/ml warming; Ethanol6mg/ml

溶液配制

5mg加入0.89ml DMSO，或者每5.63mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC1058-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

Tandutinib (MLN518)是一種有效的FLT3拮抗劑，IC50為0.22μM，同時(shí)也抑制PDGFR和c-Kit，對(duì)FLT3作用效果比CSF-1R強(qiáng)15到20倍，比FGFR、EGFR和KDR等強(qiáng)100倍以上。Phase 2。

信號(hào)通路

Angiogenesis; Protein Tyrosine Kinase

靶點(diǎn)

c-Kit

PDGFRβ

FLT3

CSF-1R

Src

IC50

0.17μM

0.20μM

0.22μM

3.43μM

30μM

體外研究

與Staurosporin不同，Tandutinib有效抑制FLT3、βPDGF和c-Kit自磷酸化，IC50為0.17-0.22μM，而作用于EGFR、FGFR、KDR、InsR、Src、Abl、PKC、PKA和MAPKs幾乎沒(méi)有效果。Tandutinib抑制不依賴IL-3的細(xì)胞生長(zhǎng)，也抑制FLT3-ITD自磷酸化，IC50為10-100nM。Tandutinib也抑制含F(xiàn)LT3-ITD突變的人白血病Ba/F3細(xì)胞增殖，IC50為10-30nM，抑制FLT3-ITD-陽(yáng)性的Molm-13和Molm-14細(xì)胞時(shí)，IC50為10nM。Tandutinib作用于FLT3-ITD陽(yáng)性Molm-14細(xì)胞而不是FLT3-ITD陰性THP-1細(xì)胞，因?yàn)樘囟ㄒ种艶LT3，處理24和96小時(shí)，分別引起顯著凋亡達(dá)51%和78%。與作用于患Aml的ITD陰性患者相比，Tandutinib優(yōu)先抑制患Aml的FLT3 ITD陽(yáng)性患者體內(nèi)爆發(fā)式集落生長(zhǎng)，而不影響正常人祖細(xì)胞形成集落。加入低納摩爾Tandutinib顯著降低Cytarabine或Daunorubicin的量，而Cytarabine或Daunorubicin是獲得抗增殖效果所必需的，說(shuō)明Tandutinib和Cytarabine/Daunorubicin聯(lián)用大大增強(qiáng)協(xié)同作用。

體內(nèi)研究

Tandutinib按60mg/kg劑量口服處理，每天兩次，顯著提高攜帶表達(dá)W51 FLT3-ITD突變型Ba/F3細(xì)胞的小鼠壽命，而作用于小鼠骨髓移植模型，顯著降低死亡率。Tandutinib按180mg/kg劑量每天處理兩次，對(duì)正常造血功能產(chǎn)生輕微毒性，Tandutinib作用于小鼠，可以有效治療FLT3 ITD-陽(yáng)性的白血病。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

N/A

酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

方法

PDGFR家族激酶的自磷酸化實(shí)驗(yàn)是基于細(xì)胞的酶聯(lián)免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，使用表達(dá)野生型βPDGFR，嵌合蛋白βPDGFR/c-Kit和βPDGFR/Flt3的CHO細(xì)胞，含有βPDGFR的跨膜結(jié)構(gòu)域及c-Kit和Flt-3的胞漿域。細(xì)胞在96孔板上匯合，培養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)基中，然后血清饑餓處理16小時(shí)。使用濃度不斷增加的Tandutinib處理靜態(tài)細(xì)胞30分鐘，然后加入8nM PDGF-BB處理10分鐘。細(xì)胞溶解在100mM Tris，pH 7.5、 750mM NaCl、0.5% Triton X-100、10mM焦磷酸鈉、50mM NaF、10μg/ml抑肽酶、10μg/ml亮肽素、1mM苯甲基磺酰氟、1mM釩酸鈉，在15000g轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，清除裂解液。澄清的裂解液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)孔板上，孔中事先用500ng/孔1B5B11 anti-β PDGFR mAb包被，然后在室溫下溫育2小時(shí)。使用結(jié)合buffer(0.3%明膠、25mM HEPES，pH 7.5、100mM NaCl、0.01% Tween-20)沖洗三次后，然后加入250ng/ml兔單克隆抗磷酸抗體，實(shí)驗(yàn)板在37℃下溫育60分鐘。隨后,每孔使用結(jié)合buffer沖洗三次，再與1μg/ml辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗兔抗體在37℃下溫育60分鐘?？字袥_洗后，加入2,2'-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)，在650nM處檢測(cè)底物形成率。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

Ba/F3、Molm-13、Molm-14、HL60、Aml193、KG-1、KG-1a、THP-1和RS4;11

濃度

溶于DMSO，終濃度為~30μM

處理時(shí)間

~7天

方法

使用濃度不斷增高的Tandutinib(0.004-30μM)處理細(xì)胞。細(xì)胞在組織培養(yǎng)基中生長(zhǎng)3-7天，使用臺(tái)酚藍(lán)染色排除法測(cè)定細(xì)胞，然后計(jì)數(shù)。收集細(xì)胞，沖洗，然后懸浮在100μl含10mM HEPES (pH 7.4)，140mM NaCl和2.5mM CaCl₂的結(jié)合buffer中，每天一次。在細(xì)胞懸液中加入膜聯(lián)蛋白V-FITC(100ng)和碘化丙啶(250ng)，然后在室溫下溫育15分鐘。在FACSort流式細(xì)胞儀上染色后，立刻進(jìn)行流式細(xì)胞儀技術(shù)，然后在488nM處測(cè)定激發(fā)光。在515nM和585nM處分別測(cè)定膜聯(lián)蛋白V-FITC和DNA碘化丙啶染色的熒光值。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

注射表達(dá)W51 FLT3-ITD突變型的Ba/F3細(xì)胞的雌性無(wú)胸腺裸鼠

配制

懸浮在溶于水溶液的0.5%甲基纖維素(MC)上

劑量

40-120mg/kg/day

給藥方式

口服飼喂

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

SC1058-10mM

Tandutinib (FLT3抑制劑)

10mM×0.2ml

SC1058-5mg

Tandutinib (FLT3抑制劑)

5mg

SC1058-25mg

Tandutinib (FLT3抑制劑)

25mg

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說(shuō)明書

1份