化學(xué)名

(3R,4R)-3-(5,6-dihydro-4H-pyrrolo[3,2,1-ij]quinolin-1-yl)-4-(1H-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione

簡稱

Tivantinib

別名

ARQ197, ARQ-197, ARQ 197, UNII-PJ4H73IL17

中文名

N/A

化學(xué)式

C₂₃H₁₉N₃O₂

分子量

369.42

CAS號

905854-02-6

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO73mg/mlEthanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.35ml DMSO，或者每3.69mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF5355-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

Tivantinib (ARQ 197)是個(gè)非ATP競爭性的c-Met抑制劑，在無細(xì)胞試驗(yàn)中Ki為0.355μM，對Ron幾乎沒有作用活性，對EGFR、InsR、PDGFRα和FGFR1/4沒有抑制作用。Phase 3。

信號通路

Protein Tyrosine Kinase

靶點(diǎn)

c-Met

－

－

－

－

IC50

0.355μM(Ki)

－

－

－

－

體外研究

ARQ-197抑制HGF/c-met誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)。ARQ-197具有抗腫瘤活性，抑制A549，DBTRG和NCI-H441細(xì)胞增殖，IC50分別為0.38、0.45、0.29μM。用ARQ-197處理，導(dǎo)致MAPK信號級聯(lián)放大磷酸化降低，且阻斷入侵和遷移。此外，沒有內(nèi)源性c-Met表達(dá)的NCI-H661細(xì)胞中c-Met異常表達(dá)，形成一種入侵表現(xiàn)型，也被ARQ-197抑制。加入濃度不斷增加的ARQ-197不會明顯影響ATP的Km值，但是用0.5μM ARQ-197處理c-Met，則降低c-Met的Vmax值，降低3倍。ARQ-197降低Vmax而不影響ATP的Km值說明ARQ-197抑制c-Met是非ATP競爭抑制，也說明ARQ-197具有高度激酶選擇性。ARQ-197抑制人類重組c-Met，具有恒定的Ki值，為355nM。雖然使用過的ATP最高濃度為200μM，但是當(dāng)ATP濃度為1mM時(shí)，ARQ-197抑制c-Met效果不會降低。ARQ-197抑制c-Met磷酸化，且阻斷下游c-Met信號通路。ARQ-197阻斷組成型和配體調(diào)節(jié)的c-Met自磷酸化，通過增強(qiáng)c-Met活性，反過來抑制下游c-Met效應(yīng)器。ARQ-197作用于表達(dá)c-Met的人類癌細(xì)胞包括HT29、MKN-45和MDA-MB-231細(xì)胞，誘導(dǎo)caspase依賴的凋亡。

體內(nèi)研究

ARQ-197處理 HT29、MKN-45和MDA-MB-231三種移植瘤模型，腫瘤生長率分別降低66%,45%和79%。ARQ-197按200mg/kg劑量口服給藥這三種移植瘤模型，顯示體重都沒有明顯改變。藥效學(xué)方面，ARQ-197作用于人類結(jié)腸移植瘤HT29，強(qiáng)抑制c-Met的磷酸化，ARQ-197按200mg/kg劑量單獨(dú)口服給藥24小時(shí)后，c-Met自磷酸化強(qiáng)烈下降。總之，ARQ-197抑制人類c-Met依賴的移植瘤生長。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

ARQ-197是個(gè)應(yīng)用到晚期人類臨床試驗(yàn)的c-Met選擇性抑制劑。

酶活性檢測實(shí)驗(yàn)

方法

100ng重組c-Met蛋白和濃度不斷增高ARQ-197在室溫下預(yù)溫育30分鐘。隨后，100μM聚Glu-Tyr底物和含5μCi [γ-32P]ATP的不同濃度ATP加到反應(yīng)混合物中。反應(yīng)在室溫下進(jìn)行5分鐘，然后加入5μl SDS-聚丙烯酰胺膠,降低樣本緩沖液。上樣到7.5%丙烯酰胺膠上，進(jìn)行SDS-PAGE。通過放射自顯影觀察到磷酸化的聚Glu-Tyr底物。通過光密度法測定c-Met活性。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

T29，MKN-45和MDA-MB-231細(xì)胞

濃度

0.03-10μM

處理時(shí)間

24、32和48細(xì)胞

方法

HT29，MKN-45和MDA-MB-231細(xì)胞按每孔5×10³個(gè)接種在96孔板上，孔中有含10% FBS的培養(yǎng)基，在黑暗中過夜處理。第二天，用濃度不斷增長的ARQ-197(0.03-10μM)在37℃下處理細(xì)胞24、32和48小時(shí)。ARQ-197處理后，移除培養(yǎng)基，細(xì)胞在含2μg/ml Hoescht 33342的標(biāo)簽溶液(10mM HEPES，140mM NaCl和6mM CaCl₂)中溫育至少10分鐘，用Annexin V-FITC(稀釋500倍)和1μg/ml碘化丙錠染色。進(jìn)行高含量的圖像采集和分析，每孔獲取四個(gè)圖像。4,6-二脒基-2-苯基吲哚，F(xiàn)ITC和羅丹明通道分別在16.7ms/10%，500ms/35%和300ms/30%進(jìn)行處理。處理圖像，測定每組通道和每種情況下的陽性細(xì)胞數(shù)。此外，在有或者沒有25、50和100μM ZvAD-FMK存在條件下，HT29細(xì)胞用濃度不斷增加的ARQ-197處理32小時(shí)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。測定抑制c-Met是否導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，當(dāng)使用siRNA分解磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)和c-Met時(shí)ARQ-197的作用效果。HT29，MKN-45和MDA-MB-231細(xì)胞轉(zhuǎn)染無靶點(diǎn)對照siRNA，GAPDH靶點(diǎn)對照siRNA，或met靶點(diǎn)siRNA。3天后，使用特點(diǎn)抗體測定c-Met，GAPDH和β-actin表達(dá)水平。為了測定caspase依賴是否影響，HT29，MKN-45和MDA-MB-231細(xì)胞轉(zhuǎn)染met靶點(diǎn)siRNA，進(jìn)行2天。然后在有或沒有濃度不斷增高的ZvAD-FMK存在下再溫育1天。無靶點(diǎn)siRNA和GAPDH siRNA也轉(zhuǎn)染，作為對照。然后用Annexin V-FITC和碘化丙錠進(jìn)行細(xì)胞染色，測定凋亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

攜帶HT29、MKN-45或MDA-MB-231移植瘤的無胸腺裸鼠

配制

溶于PEG 400/20%維生素E，聚乙二醇琥珀(60:40)30mg/ml

劑量

200mg/kg

給藥方式

口服處理

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

SF5355-10mM

Tivantinib (c-Met抑制劑)

10mM×0.2ml

SF5355-5mg

Tivantinib (c-Met抑制劑)

5mg

SF5355-25mg

Tivantinib (c-Met抑制劑)

25mg

—

說明書

1份