產(chǎn)品描述
 

Hieff NGS^® Ultima^TM DNA Ligation Module是針對Illumina^®高通量測序平臺文庫構(gòu)建專業(yè)設(shè)計的DNA連接模塊，其中的亮點為本產(chǎn)品采用一款我公司自主研發(fā)的高效連接酶Fast T4 DNA ligase。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina^®測序平臺適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡便、可實現(xiàn)自動化等優(yōu)勢。本產(chǎn)品已與Hieff NGS^® Ultima^TM Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace^® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫構(gòu)建，通過Illumina^®高通量平臺測序驗證其有效性。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量與功能驗證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

質(zhì)量控制
 

Fast T4 DNA Ligase

1. SDS-PAGE純度：>95%。

2. 16小時孵育檢測：50 μL反應(yīng)體系中包含5μl本酶和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解；50 μL反應(yīng)體系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解。

3. RNase活性：5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及，37°C下孵育16小時。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，條帶無降解。

4. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，RF II轉(zhuǎn)化比率<10%。

5. 核酸外切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中加入至少5 μl本酶和1 μg聲振的[3H]DNA（105 cpm/μg），37°C下孵育4小時，釋放的放射性<0.1%。

6. 功能活性（平末端連接）：50 μL反應(yīng)體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.5 µL Fast T4 DNA Ligase，18 μgHaeIII φX174，16°C孵育7.5分鐘。經(jīng)瓊脂糖電泳檢測，片段連接率>95%。

7. 功能活性（接頭連接）：50 μL反應(yīng)體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.125 µL Fast T4 DNA Ligase，8 nmol12 bp接頭，16°C孵育過夜。經(jīng)瓊脂糖電泳檢測，無明顯未連接接頭。

Fast Ligation Buffer

1. 16小時孵育檢測：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解；50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解。

2. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，RF II轉(zhuǎn)化比率<10%。

3. RNase活性：在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C下孵育16小時。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，條帶無降解。

4. 磷酸酶活性檢測：在磷酸酶活性檢測緩沖液中加入1×Fast Ligation Buffer和2.5 mM對硝基苯磷酸，37°C下孵育4小時。經(jīng)光譜測定法檢測，405 nm處無對硝基苯陰離子特征吸收峰。