培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：DMEM/F12+10%FBS
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%
溫度：37℃
細(xì)胞描述
名稱(chēng)：C57小鼠外周血自然殺傷細(xì)胞
數(shù)目：大于106 /管
活力：＞90%
凍存：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸（1管）或者活細(xì)胞一瓶
用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療
細(xì)胞傳代方法
顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)覆蓋80%底面積時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時(shí)候才傳代，那樣細(xì)胞容易老化。
在生物安全柜或者超凈臺(tái)中，將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中
用PBS或者生理鹽水洗一遍
加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶，在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘
然后取出細(xì)胞，加入5ml培養(yǎng)基，吹打均勻后，轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm 離心5分鐘
離心后，去掉上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:3-1:5的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
注：C57小鼠外周血自然殺傷細(xì)胞不宜進(jìn)行多次傳代培養(yǎng)，使用新鮮的p0代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞復(fù)蘇方法
取出凍存管后，投入37℃水浴中，震蕩解凍2 min，
酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入5 ml 37℃預(yù)熱的DMEM/F12+10%FBS培養(yǎng)基
將離心管離心（1000rpm，5 min）
棄去上清，再加入5ml 自然殺傷細(xì)胞完全培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存方法
本品使用DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO 凍存液冷凍。
關(guān)鍵字： 小鼠外周血自然殺傷細(xì)胞
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