本試劑盒采用可以特異性結(jié)合核酸的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽、高pH值時DNA從硅膠膜上洗脫下來。本試劑盒用于從小劑量的血清/血漿中提取游離DNA，所得游離DNA可直接用作PCR模板、雜交等分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
·采用硅基質(zhì)膜吸附柱，簡單、快速提取循環(huán)核酸。
·無需酚仿等有機試劑，安全無毒。
· Carrier RNA可以從體系中高效捕獲微量核酸。
·徹底去除污染物和PCR抑制劑，方便下游應(yīng)用。

試劑盒組成：

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。Carrier RNA配置成儲液后置于-20℃。

Carrier RNA儲存液的配制：
在次使用Carrier RNA時，請將Carrier RNA（310μg）溶解在310μl RNase-Free ddH2O中，將溶液分裝儲存于-20℃，此時該溶液的濃度為1 μg/μl；該儲存液應(yīng)避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不能超過3次。

注意事項：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．自備試劑：無水乙醇
2．樣品使用量的確定：
  吸附柱容量：700 μl
  最小洗脫體積：20 μl
  樣本體積：量200 μl
3．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4．所有的樣品使用前請平衡到室溫（15-25℃)。
5．次使用試劑盒時，請按照試劑瓶上的提示在緩沖液GD和漂洗液PW中添加無水乙醇。
6．為了確保從微量樣本中得到更多的DNA，試劑盒配備了Carrier RNA。由于Carrier RNA本身是小核酸，所以得到的基因組測定OD₂₆₀值會比真實值偏大，建議將得到的基因組直接用PCR進行檢測。

使用方法：
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取100 μl -200 μl血清/血漿到2ml的離心管中，如不足100 μl，加緩沖液GA到100 μl終體積。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋混勻。
3．加入200 μl的緩沖液GB （可加入1 μl Carrier RNA儲存液，濃度為1 μg/μl），輕輕顛倒混勻，56℃孵育10min，并不時搖動樣品。簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般56℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
4．加入200 μl的乙醇（96-100%）。如果室溫超過25℃，請將乙醇置冰上預(yù)冷。輕輕顛倒混勻樣品，室溫放置5 min，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
5．將上一步所得溶液添加到一個吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
6．向吸附柱CR2中加入500 μl緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
7．向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
8．重復(fù)操作步驟7。
9．12000rpm （~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR2置于室溫放置2-5 min，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
10．將吸附柱CR2轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min，將溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20 μl，體積過小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再次加入吸附柱CR2中，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。