重組腸激酶

Cat.No.: REK08

CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9

儲存溫度：-20℃或以下

來源：重組牛腸激酶，大腸桿菌表達(dá)

蛋白序列：氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。

1.產(chǎn)品簡介

雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經(jīng)HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）?？梢栽谳^寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質(zhì)N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽。

2.產(chǎn)品特性

單位定義：1U定義為在25℃，12h~16h之內(nèi)，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

3.推薦使用方法

1）25℃酶切條件：

   按照酶活性定義，酶切條件舉例：

   25mM Tris-HCl 8.0體系中：

   融合蛋白  0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100µg）

   重組EK   0.1-0.2U

   25℃過夜酶切，或完全酶切需12-16h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。

2）4℃低溫酶切條件：

   4℃能對底物進(jìn)行有效酶切，但需要將酶切時間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。

3）酶切優(yōu)化和放大

  優(yōu)化：可以對酶切條件進(jìn)行優(yōu)化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測酶切效果。

  放大：選擇優(yōu)化后的反應(yīng)條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測酶切效果。

4）去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如sigma T0637）去除重組腸激酶。

5）注意：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。

4.常見影響腸激酶活性的因素

在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切：

1）為獲得理想酶切結(jié)果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進(jìn)行酶切。

2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500µg蛋白）。

3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當(dāng)增加酶量或延長酶切時間，也可達(dá)到較好酶切效果。

5.儲存和運(yùn)輸穩(wěn)定性

酶液儲存穩(wěn)定性：-20℃，24個月穩(wěn)定；25℃，一周內(nèi)，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa²⁺，50%甘油。

酶液反復(fù)凍融穩(wěn)定性：反復(fù)凍融5次，無活性損失。

運(yùn)輸穩(wěn)定性：藍(lán)冰保溫運(yùn)輸，穩(wěn)定。

6.產(chǎn)品優(yōu)勢
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點(diǎn)：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (D-D-D--D-K)。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。

無動物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料。

質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。

符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2008質(zhì)量體系并符合GMP指導(dǎo)原則。

質(zhì)量文件完整：按客戶需求，可提供相關(guān)法規(guī)支持文件。

7.相關(guān)產(chǎn)品

重組羧肽酶B；

序列分析純胰蛋白酶；

重組人胰蛋白酶；

重組抑肽酶。