二胺氧化酶(DAO)檢測(cè)試劑盒
分光光度法 50 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為 醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān),能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度。
測(cè)定原理:
DAO 催化尸胺產(chǎn)生醛和過(guò)氧化氫,外源添加過(guò)量的辣根過(guò)氧化物酶,催化過(guò)氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺 生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺,在 460nm 處有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定該波長(zhǎng)吸光度增加速率,計(jì)算 DAO 活性。
自備儀器和用品:
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、蒸餾水。
粗酶液提取:
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 20min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì) 胞加入 1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 10000g, 4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3、血清等液體:直接測(cè)定。
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