還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒說明書 

微量法 100T/96S 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GSH 是細胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾?作用。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標。因此，測定細胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。

測定原理： 

DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物，在 412nm 處有特征吸收峰；其吸光度與 GSH 含量成正比。

自備儀器和用品： 

低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。 

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑 一）進行冰浴勻漿。8000xg，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。 

2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10 4個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加 入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000xg， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。 3. 血清等液體：直接測定。 

GSH 測定操作： 

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中保溫 30min。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿或 96 孔板，依次加入 20μl 蒸餾水，140μl 試劑二，40μl 試劑三，混勻靜置 2min 后測定 412 nm 吸光度 A1。

4. 測定管：取微量玻璃比色皿或 96 孔板，依次加入 20μl 上清液，140μl 試劑二，40μl 試劑三，混勻靜置 2min 后測定 412 nm 吸光度 A2。

注意：空白管只需要測定一次。