化學(xué)熒光分子魯米諾是一種化學(xué)熒光分子，在過(guò)氧化氫分子存在的條件下可以轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)氨基鄰苯二甲酸，后者發(fā)出較強(qiáng)的熒光。過(guò)氧化氫是許多生物氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，因此很容易通過(guò)引入魯米諾將這些生物氧化反應(yīng)與光檢測(cè)聯(lián)系起來(lái)。例如用葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶探頭能夠檢測(cè)樣品中的過(guò)氧化氫或葡萄糖的濃度，響應(yīng)時(shí)間僅0.5s(動(dòng)態(tài)法)。將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)與免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，用光反應(yīng)表示被測(cè)的免疫成分濃度，稱(chēng)為化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(chemiluminescenceimmuneassay，CLIA)。1976年Shmeder提出了化學(xué)發(fā)光免疫分析，以魯米諾-H202及衍生物ABEI為檢測(cè)反應(yīng)顯示系統(tǒng)，目前魯米諾（luminol）及其衍生物已經(jīng)是化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定應(yīng)用中最常用的標(biāo)記物，它們?cè)趬A性條件下，通過(guò)微過(guò)氧化物酶（microperoxidase）催化，可釋放出大量光子，魯米諾可用于HRP標(biāo)記抗體的WesternBlot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交檢測(cè)，也用于現(xiàn)代刑偵血跡檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光物質(zhì)能作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的化合物須具備下列條件：發(fā)光的量子產(chǎn)率高；其理化特性與所研究的體系相匹配；其發(fā)光反應(yīng)是發(fā)光物質(zhì)氧化反應(yīng)的結(jié)果；在所用的濃度范圍內(nèi)對(duì)生物體無(wú)毒。常用的幾類(lèi)化學(xué)發(fā)光試劑有：吖啶酯(acridiniumester)，是一種用途廣泛的化學(xué)發(fā)光示蹤物，它是一個(gè)三環(huán)的有機(jī)化合物，容易氧化，且氧化反應(yīng)無(wú)需催化劑，在430nm處釋放出光子；魯米諾和異魯米諾及其衍生物是最成熟的化學(xué)發(fā)光劑，早在1964年While就作了化學(xué)發(fā)光的研究報(bào)道，魯米諾、異魯米諾及其衍生物用于化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定已取得較理想的效果。發(fā)光率檢測(cè)：最適熒光波長(zhǎng)為400nm（在60mMK2S2O8，100mMK2CO3，pH11.5溶液中檢測(cè)化學(xué)發(fā)光率）圖1為魯米諾結(jié)構(gòu)式?；瘜W(xué)發(fā)光底物魯米諾或稱(chēng)發(fā)光胺、光敏靈、流明諾，是通用的發(fā)光化學(xué)試劑，與適當(dāng)?shù)难趸瘎┗旌蠒r(shí)會(huì)發(fā)出引人注目的藍(lán)色光。它是白色至淡黃色的晶體，可溶于大多數(shù)有機(jī)極性溶劑，但不溶于水。法醫(yī)學(xué)上使用魯米諾來(lái)檢驗(yàn)犯罪現(xiàn)場(chǎng)含有的痕量血跡，生物學(xué)上則使用魯米諾作為底物來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中的銅、鐵及氰化物的存在?；瘜W(xué)發(fā)光法化學(xué)發(fā)光法(Chemiluminescence)作為一種靈敏的測(cè)定方法被廣泛用來(lái)檢測(cè)酶、細(xì)胞及生物機(jī)體中產(chǎn)生的自由基及反應(yīng)代謝物，其氧化產(chǎn)物和代謝產(chǎn)物所發(fā)出的光可用各種光度計(jì)檢測(cè)。由于化學(xué)發(fā)光法具有靈敏、快速、操作簡(jiǎn)單和價(jià)格低廉等特點(diǎn)，而被廣泛用于抗氧化劑的篩選和研究，如多酚、多糖、黃酮類(lèi)、蒽醌類(lèi)活性物質(zhì)等。測(cè)定超氧陰離子常用的化學(xué)發(fā)光體系有黃嘌呤氧化酶-魯米諾、鄰苯三酚-魯米諾及二甲基亞砜-魯米諾三種體系，前者屬于酶促體系，后兩者則屬于非酶促體系。測(cè)定羥基自由基的化學(xué)發(fā)光體系主要有硫酸銅-酵母(或骨髓細(xì)胞)-抗壞血酸-雙氧水、CuCl-H2O2-鄰菲啰啉-碳酸鹽緩沖液、硫酸銅-鄰菲啰啉-抗壞血酸-雙氧水、硫酸亞鐵-魯米諾-雙氧水和硫酸亞鐵-魯米諾5個(gè)化學(xué)發(fā)光體系，均涉及經(jīng)典的Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基，然后攻擊發(fā)光劑產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，可以用來(lái)衡量提取物清除活性氧自由基的活性。實(shí)驗(yàn)方法：采用鄰苯三酚-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系：魯米諾用0.05mol/L的NaOH溶液配成0.05mol/L濃度的溶液，在避光處保存，臨用前用雙蒸水稀釋成1mmol/L的溶液，鄰苯三酚用1mmol/LHCl配成0.01mol/L的溶液，4℃冰箱中保存，使用前用雙蒸水稀釋成16倍的6.25×10-4mol/L溶液。0.05mol/LpH10.2Na2CO3-NaHCO3緩沖液(含0.1mmol/LEDTA)用前現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)前與1mmol/L魯米諾以2：1(體積分?jǐn)?shù))混合成魯米諾和碳酸鹽緩沖液混合物。測(cè)量時(shí)，向發(fā)光池中注入10.0μL不同濃度的(0，0.08，0.4，2和10mg/mL)樣品(以樣品緩沖液為對(duì)照)，然后注入6.25×10-4mol/L鄰苯三酚0.05mL，最后加入魯米諾和碳酸緩沖液混合物0.94mL啟動(dòng)反應(yīng)(30℃)，間隔2s記數(shù)發(fā)光強(qiáng)度，測(cè)定300s的總發(fā)光積分強(qiáng)度，本底發(fā)光強(qiáng)度為未加鄰苯三酚時(shí)的發(fā)光值。另外還有化學(xué)熒光法、熒光光譜法和NBS-二氯熒光素化學(xué)發(fā)光體系進(jìn)行熒光化學(xué)發(fā)光法的測(cè)定方法等，它們的最大優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高。以上信息由Chemicalbook的曉楠編輯整理?；瘜W(xué)性質(zhì)黃色結(jié)晶粉末。易溶于堿液，能溶于稀酸，幾乎不溶于水，難溶于醇。中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中時(shí)，顯強(qiáng)烈的亮藍(lán)色熒光。熔點(diǎn)329-332℃用途用于化學(xué)發(fā)光分析檢測(cè)試劑，如：測(cè)定金屬陽(yáng)離子、血液及糖皮質(zhì)激素。用途發(fā)光測(cè)試:Emmax440nm(化學(xué)發(fā)光;60mMK2S2O8,100mMK2CO3,pH11.5;添加H2O2后)化學(xué)發(fā)光試劑及指示劑，常用于化學(xué)發(fā)光分析，如金屬陽(yáng)離子、血液免疫等等。生產(chǎn)方法3-硝基苯二甲酸經(jīng)環(huán)合，還原而得。將3-硝基苯二甲酸加入8%肼水溶液，加熱使固體溶化。加乙二醇，在蒸發(fā)器內(nèi)蒸去溶液中的過(guò)量水分，在215-220℃下加熱2min，使雜環(huán)閉合，冷卻后得黃色硝基化合物。冷卻，加10%氫氧化鈉溶液，攪拌，加入連二硫酸鈉，加熱至沸，保溫5min，再加入乙酸，冷卻得亮黃色產(chǎn)物。放置過(guò)夜，過(guò)濾得產(chǎn)物。