幾丁質(zhì)酶(Chitinase)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌 類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害 的研究熱點(diǎn)。
測定原理:
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在 585nm 處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
自備儀器和用品:
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿,蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積( ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1 ml 提 取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 20min,取上清,置冰上待測。
2. 真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4 個):提取液體積( ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1 ml 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 10000g,4℃, 離心 20min,取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液:直接測定。
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