超氧陰離子清除能力試劑盒說明書

微量法 100T/96S 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 

測定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、 核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切 的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 

測定原理： 

AP-TEMED 系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO2－，NO2－與對氨基苯磺酸和α－萘胺的 作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與 530nm 的吸光 值呈負(fù)相關(guān)。

自備儀器和用品： 

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。 

樣品處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入 提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。 粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/ml

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