谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一,催化銨離子和谷氨酸合成谷 氨酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
測定原理:
GS 在 ATP 和 Mg 2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨酰基 異羥肟酸,在酸性條件下形成的絡(luò)合物在 540nm 處有最大吸收峰,可用分光光度計測定。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(10 4個): 提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細菌或 細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰 上待測。 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提 取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
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