探討 Bufalin 對人白血病細(xì)胞系 K562/VCR 中長春新堿獲得性多藥耐藥 （MDR） 的逆轉(zhuǎn)作用。方法和結(jié)果：通過甲基噻唑基四唑測定法測定蟾牛素的增殖抑制率和逆轉(zhuǎn)指數(shù) （RI）。流式細(xì)胞術(shù) （FCM） 測定 K562/VCR 細(xì)胞中阿霉素 （ADM） 的攝取、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率。用 Wright-Giemsa 染色觀察到細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測 P-glycoprotein （P-gp） 、多藥相關(guān)蛋白-1 （MRP1） 、 Bcl-xL 和 Bax 蛋白的表達(dá)。人白血病多重耐藥 K562/VCR 細(xì)胞對 Bufalin 無交叉耐藥性。Bufalin 在 0.0002 、 0.001 和 0.005 μmol/L 濃度下的 RI 分別為 4.85 、 6.94 和 14.77。0.001 μmol/L Bufalin 預(yù)孵育 2 h 可使細(xì)胞內(nèi) ADM 熒光強(qiáng)度提高至 28.07% （P < 0.05） 并同時(shí)下調(diào) MRP1 表達(dá)，但對 P-gp 蛋白無顯著影響。細(xì)胞周期分析顯示 Bufalin 處理后細(xì)胞凋亡率增加和 G2/M 期比例明顯降低。當(dāng)暴露于 0.01 μmol/L 蟾蜍靈時(shí)，可觀察到細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化。免疫細(xì)胞化學(xué)可檢測 K562/VCR 細(xì)胞中 Bcl-xL 的下調(diào)和 Bax 表達(dá)的上調(diào)。結(jié)論：Bufalin 可部分逆轉(zhuǎn) K562/VCR 細(xì)胞的 MDR，可能通過改變 Bcl-xL/Bax 比值下調(diào) MRP1 表達(dá)和激活細(xì)胞凋亡途徑。
蟾蜍素是中藥的一種活性成分 chan'su，可誘導(dǎo)人白血病 U937 細(xì)胞的典型細(xì)胞凋亡。方法和結(jié)果：當(dāng)在沒有血清的情況下用 10 （-8） M Bufalin 處理 U937 細(xì)胞時(shí)，絲裂原活化蛋白 （MAP） 激酶活性在處理開始后 6 h 顯著增加，并在 12 h 內(nèi)升高。在 MAP 激酶激活之前，發(fā)現(xiàn) Ras、Raf-1 和 MAP 激酶激酶的活性增加，但這些酶被 Bufalin 處理瞬時(shí)激活。這些結(jié)果表明，信號從 Ras、Raf-1 和 MAP 激酶依次傳遞到 MAP 激酶。與這種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)，細(xì)胞中 cAMP 的濃度顯著降低，表明 Raf-1 也因蛋白激酶 A 磷酸化程度的降低而被激活。事實(shí)上，用毛喉素和 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤預(yù)處理 U937 細(xì)胞，已知它們會增加細(xì)胞中 cAMP 的濃度，隨后用蟾蜍素處理導(dǎo)致 Raf-1 活性和 DNA 片段化降低。為了確認(rèn) MAP 激酶參與凋亡過程，在 U937 細(xì)胞中表達(dá) MAP 激酶激酶 1 的反義 cDNA。轉(zhuǎn)化體對響應(yīng) Bufalin 的 DNA 片段化和細(xì)胞死亡均具有顯著抗性。結(jié)論：我們的研究結(jié)果表明，響應(yīng) Bufalin 的 U937 細(xì)胞中 MAP 激酶持續(xù)激活的通路是參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的至少信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。
蟾蜍素是中藥 Chan Su 中的一種活性化合物，已被證明可誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞類型的細(xì)胞凋亡。然而，已知某些胃癌細(xì)胞對 Bufalin 具有耐藥性。細(xì)胞內(nèi)分泌的酸性且富含半胱氨酸的蛋白 （SPARC） 調(diào)節(jié)增殖和細(xì)胞凋亡。本研究旨在評估 SPARC 在 Bufalin 誘導(dǎo)的 SGC7901 和 MGC803 胃癌細(xì)胞凋亡中的作用。方法和結(jié)果：SGC7901 高 SPARC 表達(dá)的細(xì)胞比低 SPARC 表達(dá)的 MGC803 細(xì)胞對蟾蜍素更耐藥。這種耐藥性被小干擾 （si） RNA 介導(dǎo)的 SPARC 敲低顯著逆轉(zhuǎn)。此外，結(jié)果表明 SPARC 通過保護(hù)線粒體完整性、減少細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞色素 c 的釋放和增加 Bcl-2/Bax 的比率來負(fù)向調(diào)節(jié) Bufalin 誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡。此外，SPARC 通過增加 Cyclin B1 和 Cyclin A 蛋白表達(dá)水平克服了 Bufalin 誘導(dǎo)的 G2/M 期阻滯。SPARC 還激活細(xì)胞存活信號，包括 Src 和 Akt，但不激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶。結(jié)論：本研究證明，SPARC 通過抑制內(nèi)在細(xì)胞凋亡途徑、抑制細(xì)胞周期停滯和激活參與增殖的某些途徑來拮抗蟾牛素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這為 SPARC 作為使胃癌細(xì)胞對 Bufalin 敏感的潛在靶點(diǎn)提供了新的證據(jù)。
幾乎所有轉(zhuǎn)錄因子都與共激活因子合作，這些激活因子募集染色質(zhì)重塑因子并與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄機(jī)制相互作用。共激活因子與癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，包括由 SRC-1 （NCOA1）、SRC-2 （TIF2/GRIP1/NCOA2） 和 SRC-3 （AIB1/ACTR/NCOA3） 組成的 p160 類固醇受體共激活因子 （SRC） 家族。鑒于它們廣泛參與許多癌癥，它們代表了新化療藥物的候選分子靶點(diǎn)。在這里，我們報(bào)告了一項(xiàng)高通量篩選工作的結(jié)果，該篩選工作確定了強(qiáng)心苷 Bufalin 作為 SRC-3 和 SRC-1 的有效小分子抑制劑。蟾蜍素強(qiáng)烈促進(jìn) SRC-3 蛋白降解，并能夠在納摩爾濃度下阻斷癌細(xì)胞生長。當(dāng)摻入納米顆粒遞送系統(tǒng)時(shí)，Bufalin 能夠減少乳腺癌小鼠異種移植模型中的腫瘤生長。我們的工作確定 Bufalin 是一種潛在的廣譜癌癥小分子抑制劑。
強(qiáng)心苷可在癌癥中誘導(dǎo)溶瘤作用。本研究旨在評估 Bufalin 和 cinobufagin 對名為 LNCaP 、 DU145 和 PC3 的前列腺癌細(xì)胞系增殖的影響。方法和結(jié)果：通過 MTT 法測量細(xì)胞增殖。通過乳酸脫氫酶測定細(xì)胞毒作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度 （[Ca（2+）]（i）） 由雙波長光譜儀系統(tǒng)測量。進(jìn)行 TUNEL 測定和流式細(xì)胞術(shù)以測量凋亡細(xì)胞的百分比。比色測定法用于測量 caspase 活性。培養(yǎng) 2-4 天后，Bufalin 和 cinobufagin 以 0.1、1 或 10 μM 的劑量抑制癌細(xì)胞的增殖。Bufalin 和 cinobufagin 對 DU145 和 LNCaP 細(xì)胞的細(xì)胞毒性呈劑量依賴性。培養(yǎng) 24 小時(shí)后，蟾蜍素或蟾蜍素增加癌細(xì)胞中的 [Ca（2+）]（i） 和細(xì)胞凋亡，以及 DU145 和 PC3 細(xì)胞中的半胱天冬酶 3 活性以及 LNCaP 細(xì)胞中的半胱天冬酶 9 活性。結(jié)論：Bufalin 和 cinobufagin 可能抑制與 [Ca（2+）]（i） 和細(xì)胞凋亡持續(xù)升高相關(guān)的前列腺癌細(xì)胞系的增殖。
CAS 465-21-4對應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)是蟾毒靈（Bufalin），以下是對其的詳細(xì)介紹：
中文名稱：蟾毒靈
英文名稱：Bufalin
CAS號：465-21-4
分子式：C24H34O4
分子量：386.52（也有資料給出為386.532，可能因計(jì)算精度而略有差異）
外觀：白色至灰白色固體
熔點(diǎn)：242~243°C
沸點(diǎn)：556.6±50.0°C（預(yù)測值）
密度：1.226±0.06g/cm3（預(yù)測值）或1.2±0.1g/cm3（另一種預(yù)測值）
閃點(diǎn)：189°C或189.0±23.6°C（預(yù)測值）
溶解性：在DMSO、DMF、Ethanol等溶劑中有一定的溶解度
酸度系數(shù)（pKa）：15.01±0.70（預(yù)測值）
穩(wěn)定性：按規(guī)格使用和貯存，不會發(fā)生分解，但需避免與氧化物接觸
來源：蟾毒靈主要來源于蟾蜍科動(dòng)物如中華大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans Cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo melanostictus Schneider）的干燥分泌物，是蟾酥中的主要免疫活性成分之一。
藥理作用：
具有明確的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和抗血管生成的作用。
是有效的Na+/K+-ATPase抑制劑，可與其亞基α1、α2和α3結(jié)合，Kd值分別為42.5 nM、45 nM和40 nM。
具有抗腫瘤活性，體外水平對多種癌細(xì)胞有抑制作用。
具有很強(qiáng)的表面麻醉作用，作用比可卡因強(qiáng)而持久。
對呼吸有興奮作用，能拮抗嗎啡的呼吸抑制。
用途：
用于含量測定、鑒定、藥理實(shí)驗(yàn)等。
在醫(yī)藥領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，如抗癌藥物的研發(fā)等。
應(yīng)在2~8°C的溫度下保存，放置于通風(fēng)、干燥的地方，避免與其他氧化物接觸。
危險(xiǎn)性：蟾毒靈屬于有毒物質(zhì)，具有急性經(jīng)口毒性。
危險(xiǎn)標(biāo)志：GHS06、T+等。
安全說明：應(yīng)遵守相關(guān)的安全操作規(guī)程和防護(hù)措施，如佩戴防護(hù)手套、眼鏡等。在接觸或處理蟾毒靈時(shí)，應(yīng)避免吸入、食入或皮膚接觸。如發(fā)生誤食或皮膚接觸等情況，應(yīng)立即就醫(yī)并遵循醫(yī)生的指導(dǎo)進(jìn)行處理。
綜上所述，蟾毒靈是一種具有重要藥理作用的化學(xué)物質(zhì)，在醫(yī)藥和科研領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。但在使用和處理過程中需要嚴(yán)格遵守相關(guān)的安全規(guī)定和操作規(guī)程以確保人員和環(huán)境的安全。
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王玲