【嘉美生物】一 表觀遺傳學(xué)的基本原理
1、表觀遺傳學(xué)概念
表觀遺傳學(xué)(epigenetics)：研究不涉及DNA序列改變的基因表達(dá)和調(diào)控,并且引起可遺傳的表型?；蛘哒f(shuō)是研究從基因演繹為表型的過(guò)程和機(jī)制的一門(mén)新興的遺傳學(xué)分支。
2、表觀遺傳學(xué)修飾機(jī)制
DNA甲基化、基因組印記、組蛋白密碼-染色質(zhì)重塑、X染色體失活。
3、表觀遺傳學(xué)研究領(lǐng)域
組蛋白（histone）；
轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor）；
DNA甲基化（DNA methylation）；
基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控（gene transcription regulation）；
細(xì)胞核內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（nuclear signal transduction）；
核內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用（nuclear protein interaction）；
生殖細(xì)胞（germ cell, oocyte,spermatocyte…）；
干細(xì)胞（sterm cell）；
腫瘤（Cancer）；
遺傳?。╥nherited diseases）。

二 甲基化以及甲基化試劑盒
1、甲基化原理
DNA甲基化(DNA methylation)是研究得最清楚、也是最重要的表觀遺傳修飾形式，主要是基因組DNA上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基間的共價(jià)結(jié)合，胞嘧啶由此被修飾為5甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5-mC)。DNA甲基化能關(guān)閉某些基因的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。 哺乳動(dòng)物中，CpG序列在基因組中出現(xiàn)的頻率僅有1%，遠(yuǎn)低于基因組中的其它雙核苷酸序列。但在基因組的某些區(qū)域中，CpG序列密度很高，可以達(dá)均值的5倍以上，成為鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū)，形成所謂的CpG島。健康人基因組中，CpG島中的CpG位點(diǎn)通常是處于非甲基化狀態(tài)，而在CpG島外的CpG位點(diǎn)則通常是甲基化的。

2、甲基化試劑盒
（1）甲基化原理以及后續(xù)檢測(cè)
甲基化特異性的PCR（methylation-specific PCR, MS-PCR）：它將DNA先用重亞硫酸鹽處理，這樣未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ谆牟蛔?，隨后行引物特異性的PCR。MS-PCR中設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，并要求：1.引物末端均設(shè)計(jì)至檢測(cè)位點(diǎn)結(jié)束；2.兩對(duì)引物分別只能與重亞硫酸鹽處理后的序列互補(bǔ)配對(duì)，即一對(duì)結(jié)合處理后的甲基化DNA鏈，另一對(duì)結(jié)合處理后的非甲基化DNA鏈。檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物，如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能擴(kuò)增出片段，則說(shuō)明該被檢測(cè)的位點(diǎn)存在甲基化；若用針對(duì)處理后的非甲基化DNA鏈的引物擴(kuò)增出片段，則說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。
（2）試劑盒信息

三 染色體免疫沉淀（ChIP）
1、染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)概念
染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來(lái)的方法，也稱(chēng)結(jié)合位點(diǎn)分析法，在過(guò)去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。
2、染色質(zhì)免疫共沉淀的步驟
步：用甲醛在體內(nèi)將DNA結(jié)合蛋白與DNA交聯(lián)
第二步：分離染色體（質(zhì)），剪切后的DNA小片段與結(jié)合蛋白結(jié)合
第三步：用特異性抗體與DAN結(jié)合蛋白結(jié)合，用沉淀法分離復(fù)合體。反向交聯(lián)操
作釋放DNA，并消化蛋白質(zhì)。
第四步：用PCR擴(kuò)增特異DNA序列，以確定是否與抗體共沉淀。
3、染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒以及相關(guān)試劑
（1）基于瓊脂糖微球吸附，通過(guò)超聲處理染色質(zhì)的試劑盒

四 端粒以及端粒酶
1、概念：什么是端粒和端粒酶
染色體兩末端的結(jié)構(gòu)為端粒，端粒也被科學(xué)家稱(chēng)作“生命時(shí)鐘”，在新細(xì)胞中，細(xì)胞每分裂一次，端粒就縮短一次，當(dāng)端粒不能再縮短時(shí)，細(xì)胞就無(wú)法繼續(xù)分裂而死亡。端粒由串聯(lián)重復(fù)的TTAGGG組成。端粒酶具有對(duì)端粒的延伸作用，在沒(méi)有端粒酶的細(xì)胞中，端粒會(huì)逐漸縮短直至損害基因；有端粒酶存在的細(xì)胞，則該酶會(huì)不斷補(bǔ)充新的端粒，使之處于一種不斷伸縮的動(dòng)態(tài)平衡中。
2、端粒酶檢測(cè)試劑盒

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