本品產僅供科研

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產品名稱：革蘭氏陰性細菌染料法熒光定量PCR試劑盒

產品規(guī)格：50次/盒

本產品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3. 產品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6. 本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產品只能用于科研

革蘭氏陰性細菌染料法熒光定量PCR試劑盒操作方法

一、制備標準曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3.在7號管中加入5 μL 陽性對照（其濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

1.用自選方法純化樣品的DNA，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。

2.如果有N個樣品，則需要進行N+2個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置qPCR反應（20μL體系，在樣品制備室進行）

如果進行定量分析，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于標準曲線樣品。

如果做定性分析，則6個標準曲線樣品只選一個做（可以選4號，其余樣品不變）。以下只介紹定量分析的反應設置。

革蘭氏陰性細菌染料法熒光定量PCR試劑盒樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。陽性對照需單獨放置，不要污染其他試劑。

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

4、自備試劑：樣品DNA。

革蘭氏陰性細菌染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項

1 所有操作嚴格按照說明書進行；

2試劑盒內各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；

3 反應液應避光保存；

4反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

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