品名：Smart-antibody? Protein G抗體純化試劑盒，貨號(hào)：P4144，品牌：Engibody

訂購(gòu)及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號(hào))

保姆級(jí)抗體純化試劑盒（Protein G法）

Smart-antibody?
Protein G抗體純化試劑盒的優(yōu)勢(shì)
 
1、本試劑盒可以純化來(lái)自腹水，血清，細(xì)胞培養(yǎng)物上清等樣本形式的抗體。
 
2、試劑盒中的Protein G純化填料可以重復(fù)使用10次以上，偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的Protein G是純化人、大鼠、小鼠，山羊，綿羊IgG抗體（包含單克隆或多克隆）的理想選擇，高特異性，高穩(wěn)定性，高親和力，低配基脫落。
 
3、本試劑盒是一個(gè)Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑及耗材，高效結(jié)合緩沖液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、中和液、Protein G填料、重力空柱（帶控流閥）、脫鹽濃縮柱、抗體儲(chǔ)存液、以及下游WB檢測(cè)所需的高特異性山羊抗小鼠二抗（HRP標(biāo)記）。

讓抗體純化變得簡(jiǎn)單高效！

第一部分：背景簡(jiǎn)介及應(yīng)用場(chǎng)景
 
Protein A、Protein G與抗體的結(jié)合特性比較
 
1、Protein G Agarose Resin 6FF、rProtein G Agarose Resin 6FF與抗體的結(jié)合
 
鏈狀球菌蛋白G，簡(jiǎn)稱Protein G,是一種來(lái)自鏈狀球菌的細(xì)胞壁蛋白。分子量約為25kDa。由白蛋白結(jié)合域 (ABD1, ABD2, ABD3)和免疫球蛋白結(jié)合域構(gòu)成。與Protein A相似，Protein G可與IgG的Fc區(qū)特異性結(jié)合,但Protein G能夠特異性結(jié)合的抗體種類更加廣泛，對(duì)于非常見(jiàn)物種IgG的結(jié)合能力也比較好，血清蛋白結(jié)合水平更低，純度也更高。重組protein G使用基因重組技術(shù)經(jīng)E.coli發(fā)酵生產(chǎn)的重組鏈狀球菌蛋白，人工除去了白蛋白結(jié)合域和細(xì)胞表面結(jié)合域，以減少非特異性結(jié)合，因此，它比天然Protein G和Protein A有更強(qiáng)大的親和力。
 
蛋白G作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上，可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合，而使其他雜蛋白流穿，具有極高的選擇性，一步親和層析就可達(dá)到超過(guò)95%的純度。
 
天然的Protein G有多個(gè)IgG結(jié)合結(jié)構(gòu)域和白蛋白結(jié)合域。 
 
天然蛋白G大量結(jié)合IgG的同時(shí)，其非Fc結(jié)合域能結(jié)合部分雜蛋白，導(dǎo)致洗脫下來(lái)的IgG純度不夠，因此科學(xué)家利用基因工程的方法克隆Protein G的基因并進(jìn)行改造，得到重組型蛋白G，其非特異性結(jié)合明顯降低。重組的蛋白G經(jīng)過(guò)改造后在C端加入了一個(gè)半胱氨酸，可以定點(diǎn)偶聯(lián)到瓊脂糖珠上，降低空間位阻的同時(shí)提高IgG的結(jié)合能力。一步親和層析后樣品純度可超過(guò)95%。
 
但蛋白G與lgG的結(jié)合強(qiáng)度很大程度上依賴于該抗體的種屬和亞型，而其動(dòng)態(tài)結(jié)合能力則決定于結(jié)合強(qiáng)度(解離常數(shù))及流質(zhì)阻力等多種因素 (例如上樣時(shí)樣品在柱內(nèi)的停留時(shí)間)。
 
本試劑盒中使用的即是優(yōu)化重組的蛋白G (rProtein G)偶聯(lián)的Agarose Resin 6FF
 
Protein A和Protein G各具特點(diǎn)。Protein G能夠結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG, 且具有更高的親和力(最適合人、大鼠、小鼠，山羊，綿羊的抗體純化)，但卻不能像protein A一樣可以經(jīng)受住嚴(yán)苛的洗脫條件。另外，蛋白G還能結(jié)合Fab段。
 
Engibody品牌Protein G填料的優(yōu)勢(shì)：
貨號(hào)：P2709，品名：Protein G Agarose Resin 6FF
 
1、rProtein G經(jīng)過(guò)了序列優(yōu)化并進(jìn)行了重組表達(dá)，Protein G與瓊脂糖微球偶聯(lián)時(shí)用的是氨基酸序列C末端最后一個(gè)半胱氨酸（基因工程改造得到的），因?yàn)榘腚装彼嵩诘鞍仔蛄兄斜容^稀有，這樣可以基本實(shí)現(xiàn)把Protein G定點(diǎn)定向偶聯(lián)到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein G分子均處于有效的空間構(gòu)象，純化效率和親和力得到大大提升！
 
2、因其基質(zhì)的耐壓性（可耐受最高0.3 MPa的壓力），該產(chǎn)品可以用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，可在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的抗體的純化。
 
Protein A和Protein G對(duì)不同種屬和不同抗體亞型有不同的結(jié)合能力
需要根據(jù)這個(gè)表格來(lái)選擇適合目的抗體的純化填料
 
 
 

第二部分：技術(shù)原理
Protein G填料捕獲抗體分子的微觀示意圖

Protein G結(jié)合抗體分子CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的交界部位，還可以識(shí)別部分種類的Fab
 

第三部分：技術(shù)流程
 

第四部分：結(jié)果展示
 
小鼠抗體腹水經(jīng)過(guò)Protein G瓊脂糖填料純化后的SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果
Purification of mouse IgG using Protein G resin 6FF
 
High purity and high capacity of rProtein G 6FF resin.
 
5 mL mouse ascites fluid was loaded on the gravity flow column containing 0.5 mL settled rProtein G 6 FF resin. Bound immunoglobulin was eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
 
Lanes: (1) Raw ascites fluid; (2) Flow-through; (3) Elution 1; (4) Elution 2.
 
Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were 
 

第五部分：抗體純化試劑盒組分清單
（共計(jì)10個(gè)組分，均可單獨(dú)購(gòu)買）
 

訂購(gòu)及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號(hào))