品名：Super-His? His 蛋白純化 Kit，貨號：P3406，品牌：Engibody

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保姆級His蛋白純化試劑盒

Super-His? His 標(biāo)簽蛋白純化試劑盒的優(yōu)勢
 
1、本試劑盒中包含特殊配方的雷霆細(xì)菌裂解液，可快速裂解大腸桿菌并完全釋放可溶型his標(biāo)簽蛋白及包涵體（無需超聲破菌，無需加熱，快速溫和，完全裂解。盒內(nèi)裂解液5-10分鐘內(nèi)即可高效裂菌并完全釋放his標(biāo)簽融合蛋白）。
 
2、本試劑盒可以純化可溶性蛋白，也可以純化包涵體蛋白，可以純化大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)蛋白，也可以純化來自酵母、昆蟲及哺乳動物細(xì)胞的分泌性蛋白。
 
3、試劑盒中的鎳離子填料可以重復(fù)使用10次以上。
 
4、本試劑盒是一個Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑，高效細(xì)菌裂解液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、鎳離子填料、重力空柱（帶控流閥）以及下游WB檢測所需的高特異性his小鼠單抗。

讓His蛋白純化變得簡單高效！

第一部分：背景簡介及應(yīng)用場景
 
His標(biāo)簽是由6個組氨酸首尾相連組成的短肽，通常連接在蛋白質(zhì)的N端或C端，能夠用于重組蛋白的分離純化。由于His標(biāo)簽分子量小，其對重組蛋白的結(jié)構(gòu)及生物活性幾乎沒有影響。His抗體能夠特異性識別His標(biāo)簽，可以用于定性定量檢測His融合蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位等。
 
那么his標(biāo)簽是如何加在重組蛋白的N端或者C端呢？
 
一般在商業(yè)化的原核表達(dá)載體（最經(jīng)典的是pET-28a (+)細(xì)菌表達(dá)載體）骨架上已經(jīng)包含6個組氨酸對應(yīng)的堿基序列，可以通過多酶切位點插入目的蛋白的基因，然后構(gòu)建帶有His標(biāo)簽的重組表達(dá)質(zhì)粒。如果所用載體上沒有6個組氨酸對應(yīng)的堿基序列，可以人為加入，在基因合成目的蛋白的基因序列的時候，在其一端再加上18個堿基（6個組氨酸的堿基序列）即可。
 
His 標(biāo)簽純化蛋白的優(yōu)點
1）、His-Tag非常小，對蛋白的下游應(yīng)用無影響，且不會因為his-tag形成二聚體，純化后一般無需切除his-tag。
 
2）、N-端的His-Tag與細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達(dá)。
 
3）、采用IMAC（固定化金屬離子親和層析）純化His-Tag融合蛋白，成本低，載量大。
 
4）、His-Tag的免疫原性相對較低，可將純化的蛋白直接注射入動物體內(nèi)進(jìn)行免疫并制備抗體。
 
5）、與其它親和標(biāo)簽構(gòu)建成雙親和標(biāo)簽，并可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)。
 
His標(biāo)簽純化蛋白的缺點
1）、不能屏蔽毒性蛋白。
 
2）、鎳離子純化填料對目的蛋白的結(jié)合特異性沒有GST標(biāo)簽蛋白純化那么高。
 
3）、易形成包涵體蛋白。
 
 
第二部分：技術(shù)原理
His-Tag蛋白純化原理主要基于組氨酸（His）殘基上的咪唑基團和金屬離子如Ni2+、Co2+等的特異性結(jié)合。
 
這種結(jié)合作用使得His-Tag蛋白能夠選擇性地結(jié)合到這些金屬離子上，而其他雜質(zhì)蛋白則難以與之結(jié)合。利用這種特性，可以將His-Tag蛋白結(jié)合到裝有金屬離子的層析介質(zhì)上，如鎳離子凝膠填料。在純化過程中，可以通過改變緩沖液中的咪唑濃度來競爭性地洗脫結(jié)合在介質(zhì)上的His-Tag蛋白，從而實現(xiàn)高純度分離。
 
這種蛋白純化的方法稱之為IMAC（固定化金屬離子親和層析）
 
Ni2+在親和純化實驗中的使用最為廣泛。根據(jù)結(jié)合基團的不同，Ni2+親和層析柱可分為Ni-IDA和Ni-NTA。NTA的顆粒粒度均勻，粒徑更小，并且螯合鎳更穩(wěn)定，能耐受較高的還原劑，使填料更加穩(wěn)定，鎳離子不易脫落，因此選擇Ni-NTA親和層析柱進(jìn)行蛋白純化。
 
Co2+的載量會低于Ni2+，但特異性要比Ni2+好很多。



第三部分：技術(shù)流程


 

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