HMC1人肥大細(xì)胞HMC-1 Cell
種屬 | 人 |
別稱 | HMC1 |
組織來源 | 癌細(xì)胞系 |
疾病 | 肥大細(xì)胞白血病 |
傳代比例/細(xì)胞消化 | 1:2傳代 |
完全培養(yǎng)基配置 | IMDM培養(yǎng)基 ；10%胎牛血清 ；1%雙抗 |
形態(tài) | 淋巴細(xì)胞樣 |
生長特征 | 懸浮生長 |
STR | Amelogenin X CSF1PO 10,13 D2S1338 17,25 D3S1358 15 D5S818 12,13 D7S820 10,11 D8S1179 12 D13S317 10,11 D16S539 10,12 D18S51 14,20 D19S433 14 D21S11 29 FGA 18,20 Penta D 11 Penta E 9,19 TH01 7,9.3 TPOX 8,11 vWA 17,19 |
倍增時間 | 每周 2-3次 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 |
凍存條件 | 凍存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序凍存液 |
備注 | 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液，請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
產(chǎn)品使用 | 僅限于科學(xué)研究，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。 |
運輸和保存：
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
懸浮細(xì)胞參考：
大多數(shù)懸浮細(xì)胞對于環(huán)境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細(xì)胞密度維持在 1×10 5 到 1×10 6個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 800-1000rpm，離心 5min，棄去上清，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例（首次可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行。大多數(shù)血液類相關(guān)的懸浮細(xì)胞受運輸影響比較大，會出現(xiàn)一批死細(xì)胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉(zhuǎn)移至 T25 瓶中豎著培養(yǎng)，培養(yǎng)基添加 5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補(bǔ)液 3ml 完全培養(yǎng)基后 T25 瓶放倒，等沉淀穩(wěn)定后觀察細(xì)胞密度，持續(xù)添加培養(yǎng)基等密度上升足夠傳代為止。
3）細(xì)胞凍存:
收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
關(guān)鍵字： HMC-1 Cell ;HMC1;HMC1人肥大細(xì)胞;人肥大細(xì)胞HMC-1;HMC1人肥大細(xì)胞HMC-1;
上海博爾森生物科技有限公司成立于2020年09月02日，注冊地位于上海市松江區(qū)石湖蕩鎮(zhèn)石湖新路95號。
上海博爾森生物科技有限公司雖然年輕，但朝氣蓬勃，志向遠(yuǎn)大； 更是一家專注于生命科學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域，集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的高科技公司，并立志以競爭力的價格向客戶輸送高質(zhì)量的生物試劑。主要研究領(lǐng)域是生命科學(xué)，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)試劑、重組蛋白，抗體，實驗技術(shù)服務(wù)等多個應(yīng)用領(lǐng)域。主要產(chǎn)品有：Elisa檢測試劑盒、PCR檢測試劑盒、抗體、重組蛋白，蛋白定制，細(xì)胞系，原代細(xì)胞，常用實驗試劑，染色液等科研產(chǎn)品。