HMC-1 人肥大細(xì)胞 一、細(xì)胞基本屬性 細(xì)胞名稱 HMC-1 人肥大細(xì)胞 細(xì)胞別稱 HMC-1  種屬來源 人 生長特性 懸浮生長 細(xì)胞形態(tài) 淋巴母細(xì)胞樣 簡介 來源于一名 52 歲男性肥大細(xì)胞白血病患者的外周血樣本。該細(xì)胞有多重亞型分別 為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細(xì)胞功能研究，因?yàn)樗鼈?表現(xiàn)出組織肥大細(xì)胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細(xì)胞表 面抗原譜的表達(dá) （1,2）。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細(xì)胞上表達(dá)，在肥大細(xì)胞 的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細(xì)胞生長失調(diào)有關(guān)， 并與肥大細(xì)胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥有關(guān)。據(jù)報(bào)道，HMC-1 細(xì)胞系中存在兩 個(gè) KIT 激活點(diǎn)突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài) ，導(dǎo)致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1 （560,816））是HMC-1 細(xì)胞系的兩個(gè)變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不 具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時(shí)具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC- 1.1 更高的增殖率。有人認(rèn)為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變 。 生物安全等級(jí) 1 細(xì)胞規(guī)格 1×10 6cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 支原體檢測(cè) 無 培養(yǎng)基 準(zhǔn)備 IMDM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 培養(yǎng)條件 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ 凍存條件 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 細(xì)胞接收后的處 理 1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒15ml離心管，若發(fā)現(xiàn)有破損、有液溢出及 細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。 2）離心管直接在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基 重懸細(xì)胞后，根據(jù)離心后的沉淀量進(jìn)行傳代，轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中后，請(qǐng) 在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20× ）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的 依據(jù)。 3）懸浮細(xì)胞：傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有利，因此我?guī)旖ㄗh 您使用【半換液法】進(jìn)行傳代，剛收到細(xì)胞時(shí)建議1:2傳代較為合適。將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含8mL完全培 養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。 然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下 觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。 如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于懸浮細(xì)胞傳代可以參考以下方法： 對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法【半換液法】： 懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般 情況下細(xì)胞密度維持在1×10 5~1×10 6個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正 常生長。 【離心換液法】： 如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培 養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配 置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。 1） 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面 T25瓶為例； 1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)， 來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10 6~1×10 7個(gè)活細(xì)胞/ml. 2. 1000rpm離心5min，去掉上清。用無血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1× 10 6~1×10 7個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、 日期等信息。 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同 時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。 三．細(xì)胞出現(xiàn)問題，予以重發(fā)情況： 1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2. 細(xì)胞污染問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3 天內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)； 3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提 供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)； 4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2 小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)； 5. 細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力， 和每天的細(xì)胞照片，核實(shí)后予重發(fā)； 6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3 天請(qǐng)拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到 細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題的照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù) 人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。 四、細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況： 1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6. 收到細(xì)胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于7 天的，不重發(fā)； 7. 視具體情況而定 注意事項(xiàng)： 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)， 所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液 氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹 掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。