GAPDH敲低通過自噬和抗氧化應(yīng)激途徑減少魚藤酮誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞死亡。[Pubmed：25725130]

2015 年 5 月 5 日;234(3):162-71.

GAPDH以其管家功能而聞名，也被證明在饑餓、化學(xué)損傷和氧化應(yīng)激等壓力條件下參與細(xì)胞損傷、細(xì)胞凋亡和死亡。本研究考察了 GAPDH 敲低對魚藤酮反應(yīng)細(xì)胞損傷的影響。
方法和結(jié)果：
在暴露于魚藤酮（0 nM、20 nM、40 nM 和 80 nM）之前，使用 siRNA 在 H9C2 心肌成細(xì)胞中敲低 GAPDH。通過蛋白質(zhì)印跡檢測自噬蛋白（Beclin-1、Atg5、LC-3A/B 和 p62）的自噬，并通過 MDC 染色檢測酸性物質(zhì)。使用促細(xì)胞凋亡蛋白和流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞凋亡和死亡，并測量細(xì)胞內(nèi) ATP 相對濃度。通過測量DCFH-DA、TBARS、GSH和SOD來評估氧化應(yīng)激。 在這項研究中，GAPDH敲低增強了魚藤酮誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞的自噬，減少了氧化應(yīng)激，增加了抗氧化途徑;并減少細(xì)胞凋亡和死亡。此外，GAPDH敲低保留了細(xì)胞能量。
結(jié)論：
siRNA介導(dǎo)的GAPDH敲低減少了魚藤酮誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞死亡，通過自噬和抗氧化應(yīng)激途徑發(fā)生。本研究豐富了對GAPDH病理生理作用的理解，為以氧化應(yīng)激為特征的心臟病狀態(tài)提供了潛在的新治療靶點。

JNK 抑制 VMAT2 有助于魚藤酮誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和多巴胺神經(jīng)元死亡。[Pubmed： 25496994]

毒物學(xué)。2015 2 月 3;328：75-81.

魚藤酮治療，無論是體外還是體內(nèi)，都被廣泛用于模擬帕金森病在暴露于環(huán)境神經(jīng)毒物和殺蟲劑時的多巴胺神經(jīng)元死亡。魚藤酮神經(jīng)毒性的潛在機制仍在確定中。
方法和結(jié)果：
我們最近的研究表明，魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)元死亡涉及微管不穩(wěn)定，這導(dǎo)致胞質(zhì)多巴胺的積累，從而導(dǎo)致活性氧 （ROS）。此外，魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)元死亡需要 c-Jun N 末端蛋白激酶 （JNK）。在這里，我們報告了 JNK 的神經(jīng)特異性 JNK3 亞型，而不是 JNK1 或 JNK2，是原代培養(yǎng)的多巴胺神經(jīng)元中這種神經(jīng)元死亡的原因。用紫杉醇（一種微管穩(wěn)定劑）治療可減弱魚藤酮誘導(dǎo)的磷酸化，并可能減弱 JNK 的激活。這表明 JNK 在魚藤酮暴露時被微管不穩(wěn)定激活。此外，魚藤酮抑制 VMAT2 活性，但不抑制 VMAT2 蛋白水平。值得注意的是，用 JNK 的藥理學(xué)抑制劑 SP600125 治療可減弱魚藤酮對 VMAT2 的抑制。此外，重組 JNK3 蛋白與純化的中腦突觸囊泡體外孵育后 VMAT2 活性降低表明 JNK3 可以抑制 VMAT2 活性。
結(jié)論：
結(jié)合我們之前的研究結(jié)果，這些結(jié)果表明魚藤酮通過一系列連續(xù)事件誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元死亡，包括微管不穩(wěn)定、JNK3 激活、VMAT2 抑制、胞質(zhì)多巴胺積累和 ROS 的產(chǎn)生。我們的數(shù)據(jù)確定 JNK3 是 VMAT2 活性的新型調(diào)節(jié)因子。

魚藤酮降低細(xì)胞內(nèi)醛脫氫酶活性：對帕金森病發(fā)病機制的影響。[Pubmed：25645689]

J 神經(jīng)化學(xué)。2015年4月;133(1):14-25.

線粒體復(fù)合物 I 抑制劑魚藤酮的重復(fù)全身給藥可產(chǎn)生帕金森病 （PD） 的嚙齒動物模型。魚藤酮誘導(dǎo)的黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元損傷的相對選擇性機制仍不完全清楚。 根據(jù)“兒茶酚醛假說”，自身毒性多巴胺代謝物 3,4-二羥基苯乙醛 （DOPAL） 的積聚會導(dǎo)致 PD 發(fā)病機制。囊泡攝取阻斷會增加DOPAL水平，DOPAL主要通過醛脫氫酶（ALDH）解毒。
方法和結(jié)果：
我們測試了魚藤酮是否干擾囊泡攝取和細(xì)胞內(nèi)ALDH活性。在與魚藤酮（0-1000 nM，180分鐘）一起孵育的PC12細(xì)胞中測量內(nèi)源性和F標(biāo)記的兒茶酚，不含或與F-多巴胺（2μM）一起孵育，以跟蹤囊泡攝取和兒茶酚胺代謝。魚藤酮劑量依賴性地增加多巴、F-多帕爾和3,4-二羥基苯乙醇（DOPET）水平，同時降低多巴胺和3,4-二羥基苯乙酸（DOPAC）水平以及多巴胺與其脫氨代謝物總和的比率。在試管中，當(dāng)提供NAD（+）時，魚藤酮不影響ALDH將DOPAL轉(zhuǎn)化為DOPAC，而直接作用的ALDH抑制劑苯諾酰顯著增加DOPAL并降低反應(yīng)混合物中的DOPAC濃度。我們提出魚藤酮通過降低ALDH活性和減弱細(xì)胞質(zhì)兒茶酚胺的囊泡隔離來建立細(xì)胞內(nèi)DOPAL。
結(jié)論：
研究結(jié)果為魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元選擇性毒性提供了新的機制。我們報告說，魚藤酮是一種產(chǎn)生帕金森病動物模型的線粒體復(fù)合物 I 抑制劑，通過減少醛脫氫酶 （ALDH） 的 DOPAL 代謝和減少囊泡單胺轉(zhuǎn)運蛋白 （VMAT） 對細(xì)胞質(zhì)多巴胺的囊泡隔離，增加有毒多巴胺代謝物 3,4-二羥基苯乙醛 （DOPAL） 的細(xì)胞內(nèi)水平。研究結(jié)果為魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元毒性提供了新的機制。