酶活性蛋白酶K的酶活力，>30U/mg。在37℃，以血紅蛋白為底物，1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當(dāng)于1微摩爾酪氨酸Folin陽(yáng)性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定義為一個(gè)單位蛋白酶K酶活力。在很寬的pH范圍內(nèi)有效，有效的pH范圍為pH4.0-12.5，最佳pH范圍為pH7.5-8.0。蛋白酶K的最佳反應(yīng)溫度為65℃，但在65℃或更高的溫度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多時(shí)候反應(yīng)溫度選擇50-55℃。應(yīng)用蛋白酶K時(shí)常應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域。在制備核酸時(shí)，蛋白酶K可以將雜蛋白去除，并迅速使核酸酶失活，避免其降解目標(biāo)產(chǎn)物DNA和RNA。另外，蛋白酶K還有其他優(yōu)點(diǎn)，它在變性劑存在下仍能保有活性，如SDS、尿素、EDTA等等，這點(diǎn)與其他蛋白酶（如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶）相當(dāng)不同。用途蛋白酶K由于能夠消化角蛋白（kratin）因此被命名為蛋白酶K。蛋白酶K家族包含了各種由真菌、酵母及革蘭氏陰性細(xì)菌分泌的細(xì)胞內(nèi)肽酶，其中細(xì)菌分泌的酶有高度的序列相似性（>55%）。林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber）分泌產(chǎn)生蛋白酶K是該家族的模式蛋白。蛋白酶K對(duì)大多數(shù)底物均有切割活性，但是偏好于帶有脂肪族及芳香烴的肽鏈。其屬于絲氨酸蛋白酶，擁有典型的絲氨酸活性位點(diǎn)：Asp39–His69–Ser224。其含有一個(gè)單練肽鏈包含277氨基酸位點(diǎn)，并擁有2個(gè)二硫鍵和一個(gè)空置的半胱氨酸位點(diǎn)以及兩個(gè)鈣離子結(jié)合位點(diǎn)。蛋白酶K的應(yīng)用主要為核酸提取時(shí)去除DNA酶和RNA酶，并且可將結(jié)合于基因組上的組蛋白去除，還可用于堿性磷酸酶的失活。目前分子生物學(xué)技術(shù)已應(yīng)用于許多檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中，例如轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、動(dòng)物屬性檢測(cè)、致病微生物檢測(cè)等。在分子生物學(xué)檢測(cè)中核酸的提取質(zhì)量直接影響了后續(xù)PCR反應(yīng)的擴(kuò)增效率。許多標(biāo)準(zhǔn)在核酸提取步驟中都設(shè)立了添加蛋白酶K消化的步驟，以期提取較純的核酸。為了保護(hù)核酸，分子生物學(xué)核酸提取實(shí)驗(yàn)中通常含有EDTA等試劑，由于EDTA可以與金屬離子絡(luò)合，因此可能會(huì)導(dǎo)致酶活性受到影響；并且通常為pH8.0時(shí)和55℃條件下進(jìn)行消化，不同pH值和溫度條件會(huì)使得酶活性受到影響。用途分離DNA和RNA期間使核苷酸酶蛋白失活。去除內(nèi)毒素對(duì)陽(yáng)離子蛋白的約束，如溶菌酶和核糖核酸酶。研究報(bào)告顯示用于分離肝，酵母，綠豆線粒體測(cè)定細(xì)胞膜上的酶用于抗體標(biāo)記，石蠟包埋組織切片中暴露抗原結(jié)合位點(diǎn)。消化腦組織樣本中的蛋白質(zhì)，用于朊病毒的傳染性海綿狀腦?。═SE）的研究