中文名：傘形毒蕈中的鬼筆環(huán)肽

英文名：Phalloidin from Amanita phalloides

英文別名：PHALLOIDIN|17466-45-4|Phalloidin from Amanita phalloides|NSC-523214|28-(2,3-Dihydroxy-2-methylpropyl)-18-hydroxy-34-(1-hydroxyethyl)-23,31-dimethyl-12-thia-10,16,22,25,27,30,33,36-octazapentacyclo[12.11.11.03,11.04,9.016,20]hexatriaconta-3(11),4,6,8-tetra

純度：≥90%

貨號：P131156

包裝：1mg

Cas號：17466-45-4

存儲溫度：-20°C儲存

產(chǎn)品介紹：

Toxic bicyclic heptapeptide isolated from fungi. Useful as a potent and specific F-actin binding agent and inhibitor of F- to G-actin conversion.

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品外觀形態(tài)：固體（注：鬼筆環(huán)肽系列產(chǎn)品有固體和液體兩種，液體為DMSO溶解后的產(chǎn)品，則不需再溶解。）

鬼筆環(huán)肽是一種雙環(huán)七肽毒素，特異性結合在F-肌動蛋白亞基之間的界面上，將相鄰的亞基鎖定在一起。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結合比與肌動蛋白單體的結合要緊密得多，從而導致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，因此通過防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動蛋白絲，最終，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。因此，鬼筆環(huán)肽以不同于G-肌動蛋白的構型捕獲肌動蛋白單體，并通過大大降低單體解離的速率常數(shù)來穩(wěn)定F-肌動蛋白的結構。鬼筆環(huán)肽在細胞中不同濃度下的功能不同，當以低濃度引入細胞質時，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質肌動蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質是研究F-肌動蛋白在細胞中分布的有用工具，方法是用熒光類似物標記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動蛋白絲以進行光學顯微鏡檢查。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動蛋白絲以及體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡的重要工具

樣品分析方案

概述：

在微孔板孔中制備樣品

從板中的樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下觀察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。

操作步驟：

1.制備1000 X鬼筆環(huán)肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入裝有粉末的小瓶中。

2.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽綴合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類型可能染色不同。 應相應地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液。

3.染色細胞：

3.1進行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。

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