人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell? 人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒 |
貨 號(hào) | AC-1001029 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2-8℃，添加劑-20--80℃保存； 混合后 2-8℃保存，2-3 周內(nèi)使用完畢 |
使用范圍 | 人間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成脂 |
保質(zhì)期 | 1 年 |
二、產(chǎn)品簡介
人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款用于人間充質(zhì)干細(xì)胞分化成脂的試劑盒，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化。本產(chǎn)品僅限于科 學(xué)研究，不能用于臨床診斷、治療，以及其他用途。
三、產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 90mL | 1 瓶 |
人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化添加劑 | 10mL | 1 瓶 |
四、產(chǎn)品特性
l 誘導(dǎo)分化程序簡單便捷。
l 誘導(dǎo)成脂細(xì)胞效率高。
五、操作方法
1. 相關(guān)材料
? Xeno-Free 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell?:AC-1001003）
? 人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒（Applied Cell?:AC-1001029）
? 成脂檢測染液（Applied Cell?:AC-1001022）
? 細(xì)胞消化液（Applied Cell?:AC-1001024）
? 磷酸鹽緩沖液(1×) （Applied Cell?: Cat.AC-1001037）
2. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基的配制
2.1. 在 2-8℃解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化添加劑，輕晃搖勻；
2.2. 隨后將添加劑加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（10ml 添加劑與 90mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)放 2 周。
注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪維持添加劑只能在 2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑瓶 1-2 次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
3. 實(shí)驗(yàn)操作
誘導(dǎo)成脂（以 6 孔板為例）
3.1. 將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到 6 孔板上，密度為 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2× 105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
3.2. 當(dāng)人間充質(zhì)干細(xì)胞融合度達(dá)到 80-90%時(shí)，開始誘導(dǎo)脂肪前體細(xì)胞分化。吸掉 Xeno-Free 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，每孔加 1ml 預(yù)熱 PBS 清洗一次，吸掉 PBS，加入 2 ml 人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基，以此記為第 0 天；
注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基使用前需預(yù)熱至 37℃。
3.3. 每 1-2 天更換人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基；
3.4. 第 5-6 天可以看到少量脂滴；
3.5. 第 9-14 天待脂肪滴顆粒成熟即可進(jìn)行拍照，染色。（根據(jù)情況誘導(dǎo)時(shí)間可適當(dāng)延長）
注意：①培養(yǎng)基每 1-2 天換液。由于隨著脂肪細(xì)胞的成熟，pH 的降低會(huì)觀察到培養(yǎng)基變黃。pH 從 7 降到 6.5，細(xì)胞增殖會(huì)變慢。pH 在 6.5 到 6 時(shí)，細(xì)胞活力會(huì)降低。所以誘導(dǎo)后期， 需要每天換液。
②換液時(shí)盡量不使培養(yǎng)基變干，培養(yǎng)基變干會(huì)降低細(xì)胞層對培養(yǎng)皿表面的粘附。
③細(xì)胞分化效果和供體有關(guān)。供體的年齡是一個(gè)因素。有研究發(fā)現(xiàn)與年長者相比，年輕供體來源 的細(xì)胞的分化能力更強(qiáng)。
4. 成脂檢測染液染色
4.1. 每 6ml 成脂染液加入 4ml 蒸餾水制成染色工作液，混勻室溫放置 5-10 分鐘。加入蒸餾水后，染液會(huì)有片狀結(jié)晶析出，可用直接使用或?yàn)V網(wǎng)過濾除掉結(jié)晶。
4.2. 脂肪誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸掉原有培養(yǎng)基，用 1×PBS 沖洗 1-2 次。每孔加入適量細(xì)胞固定液， 固定 20 min。
4.3. 吸掉細(xì)胞固定液，用 1×PBS 沖洗 2 次。，加入適量染色工作液，使染液完全覆蓋脂肪滴，室溫染色 15min。
4.4. 吸掉染色工作液，用 1×PBS 沖洗 2-3 次。
4.5. 將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察脂滴染色效果，拍照。
注意：染色后顯微鏡觀察，及時(shí)拍照。如果時(shí)間過長，脂肪滴會(huì)發(fā)生破裂。
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埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國FDADMF備案以及國家藥品評審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國內(nèi)6家細(xì)胞治療企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞治療一類新藥聯(lián)合申報(bào)，一項(xiàng)日本一類新藥聯(lián)合申報(bào)。