ActSep?CD3/CD28分選激活磁珠（ActSep?CD3/CD28Separation & Activation Magnetic Beads)

產(chǎn)品貨號：GMP-TL603

?產(chǎn)品描述（Description）

ActSep? CD3/CD28單抗偶聯(lián)分選激活磁珠可用于分選人 CD3+T 細(xì)胞，并提供了一種不需要抗原 呈遞細(xì)胞或抗原就能激活和擴增 T 細(xì)胞的簡單方法。通過在磁珠上偶聯(lián)抗 CD3 和抗 CD28 單克隆抗體，提供 T 細(xì)胞激活和擴增需要的初級和協(xié)同刺激信號，實現(xiàn) T 細(xì)胞的分選、激活和擴增。此 款磁珠適用于人 T 細(xì)胞，CAR-T 等多種 T 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用。

? 產(chǎn)品特點（Advantages）

1、 分選、激活于一體，省時高效

2、4.5μm超順磁珠，與細(xì)胞大小匹配

3、方便分離，易操作

4、高穩(wěn)定性、高安全性

5、產(chǎn)品符合ISO9001和ISO13485質(zhì)控要求

? 反應(yīng)種屬（Reaction Species）

人

? 濃度（Concentration）

2×108beads/mL

?內(nèi)毒素（Endotoxin）

<0.5EU/mL

? 含量（Content）

1mL

? 性狀（Character）

棕色懸濁液體

? 儲存條件（Storage conditions）

2~8℃

? 有效期（Validity period）

24個月

? 使用方法（Usage method）

1. PBMC 細(xì)胞處理：

  1.1 將人的PBMC細(xì)胞重懸于含1% HSA的PBS緩沖液中，取樣計數(shù)并標(biāo)記CD3進行流式檢測。

  1.2 根據(jù)PBMC細(xì)胞CD3陽性率用含1% HSA的PBS緩沖液調(diào)節(jié)CD3 +T細(xì)胞密度至1×107個/mL。

2. ActSep? CD3/CD28分選激活磁珠的清洗： 

  2.1 重懸磁珠（渦旋不低于30s，或者顛倒混勻5 min）。 

  2.2 按照磁珠數(shù)和CD3+T細(xì)胞孵育比例（推薦比例范圍為1:1 ~ 3:1。在此推薦范圍內(nèi)，隨著磁珠量的增加，CD3+T細(xì)胞分選效率會隨之提升。在實際應(yīng)用中，客戶可根據(jù)實際情況摸索調(diào)整），取出所需磁珠量，轉(zhuǎn)移到離心管中。

  2.3 向上述離心管中加入l mL 含1% HSA的PBS緩沖液，將磁珠進行重懸，吹打或渦旋進行潤洗。 

  2.4 將上述裝有重懸磁珠的離心管放在磁力架（磁珠專用）上，靜置 1 min，棄去上清，注意不要吸取到磁珠。

3. 磁珠分選和激活CD3+T 細(xì)胞： 

  3.1 向上述洗滌后的磁珠中按比例加入調(diào)整好 CD3+T 細(xì)胞密度的 PBMC，混合均勻。

  3.2 將上述離心管置于轉(zhuǎn)速 15~20 rpm 的混樣儀上，室溫孵育 30 min。 

  3.3 將上述離心管放在磁力架（磁珠專用）上，靜置 1min，收集上清并進行計數(shù)和流式檢測， 標(biāo)記CD3。 

  3.4 用含200 IU/mL rh IL-2（同立海源, Cat: GMP-TL777）的完全培養(yǎng)基（客戶可根據(jù)自身實際 實驗條件進行調(diào)整，根據(jù)實驗需求明確是否使用自體血漿）重懸磁珠和細(xì)胞的混合物，并調(diào)整細(xì) 胞密度為0.5~1×106個/mL。

  3.5 將上述細(xì)胞懸液置于細(xì)胞培養(yǎng)容器中，于 37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h，取樣去除磁珠 后計數(shù)并測試激活效率（CD69+CD25+百分比）。 

4. 細(xì)胞的擴增和培養(yǎng)：

觀察細(xì)胞狀態(tài)并定期補液，調(diào)整細(xì)胞密度至 0.5~1×106個/mL（根據(jù)需要進行流式檢測）。將細(xì)胞 培養(yǎng)至適宜時長（一般 12~14 天）后即可收獲細(xì)胞。

? 實驗數(shù)據(jù)（Experimental Data）