分析微陣列(芯片)也稱為捕獲陣列。在這種技術中,在支撐表面上排列著一個抗體、適配體或新配體庫。這些被用作捕捉分子,因為每一個都與特定的蛋白質(zhì)結合。當捕獲分子是抗體時,它通常被稱為抗體(微)陣列。分析蛋白微陣列最具代表性的模型是抗體陣列。該陣列采用復雜的蛋白質(zhì)溶液,如細胞裂解液。利用各種檢測系統(tǒng)分析產(chǎn)生的結合反應,可以提供樣品中特定蛋白質(zhì)的表達水平信息,以及結合親和性和特異性信息。這種微陣列在比較不同溶液中的蛋白表達時特別有用。例如,細胞對某一特定因子的反應可以通過比較特定物質(zhì)處理的細胞的裂解物或在某些條件下與控制細胞的裂解物一起生長來確定。另一種應用是對病變組織的鑒定和分析。
從技術上講,蛋白質(zhì)組學研究中最常用的有兩種抗體陣列。其中一種是基于ELISA雙抗體夾心法,另一種是基于分析標簽的ELISA直接法抗體陣列。
ELISA 雙抗體夾心法抗體陣列:
酶聯(lián)免疫吸附實驗 (ELISA) 是一種利用抗體和顏色變化或熒光信號強度來鑒別物質(zhì)的實驗。在固體支架上(通常是 NC 膜或玻片)固定有未知數(shù)量抗原的樣本,通過另一種特定于同一抗原的抗體進行捕獲。將抗原固定后,加入檢測抗體,形成與抗原結合的復合物。檢測抗體可以與一種酶共價連接,也可以通過與酶或熒光素結合的次級抗體來檢測。在每一步之間,通常用溫和的洗滌劑溶液清洗,去除任何非特異性結合的蛋白質(zhì)或抗體。在最終的洗滌步驟之后,通過添加酶底物或激光掃描儀激發(fā)的激光掃描來產(chǎn)生一個可見的信號來表明樣品中抗原的數(shù)量。
直接抗原標記型抗體陣列:
另一種抗體陣列應用的模型是"分析標記"格式。在這種形式下,通過直接蛋白標記檢測抗體捕獲后的蛋白質(zhì)。在直接標記法中,復雜混合物中所有蛋白質(zhì)的共價標記提供了一種檢測抗體微陣列孵育后的結合蛋白的方法。如果蛋白質(zhì)被標記為標簽,如生物素,信號從結合蛋白可以被放大。通過一個簡單的抗原標記過程,樣品蛋白直接與生物素結合,消除了第二種抗體的需要來發(fā)展陣列信號。在這種格式中,非預期的抗體交互是不可能的,從而消除了數(shù)組面板大小的限制。
兩種抗體陣列對比:
SBI 抗體或蛋白質(zhì)玻璃芯片"LucidArray?"是化學發(fā)光膜陣列后的進化陣列平臺。LucidArray? 使用 SCHOTT NEXTERION? 載玻片的平臺。這些玻片是由高質(zhì)量的硼硅酸鹽玻璃制成,具有超平面和低固有熒光,具有一個均勻的層,提供高共價耦合效率和非常低的背景。與基于NC膜的微陣列相比,基于載玻片的微陣列容易處理,且使用更低的樣本量(只要10μl /數(shù)組)。玻片也利用熒光信號讀出,允許比化學發(fā)光更廣泛的動態(tài)檢測范圍。
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