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DiO即DiOC18(3),全稱為3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate,是最常用的細(xì)胞膜熒光探針之一,呈現(xiàn)綠色熒光。DiO是一種親脂性膜染料,進(jìn)入細(xì)胞膜后可以側(cè)向擴(kuò)散逐漸使整個細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。 DiO在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱,僅當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞膜后才可以被激發(fā)出很強(qiáng)的熒光。DiO被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光,DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中,激發(fā)波長為484nm,發(fā)射波長為501nm。
DiO的分子式為C53H85ClN2O6,分子量為881.72,CAS number為34215-57-1。 DiO可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF,溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)加熱,并用超聲處理以促進(jìn)溶解。 DiO被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-termtracer)。DiO通常不會明顯影響細(xì)胞的生存力(viability)。DiO對于細(xì)胞膜染色的熒光強(qiáng)度通常要低于DiI,有時對于某些經(jīng)過固定的組織的染色效果欠佳。 DiO除了最簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附,檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散,檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。 用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時,DiO的常用濃度為1-30μM,最常用的濃度為5-10μM。DiO可以直接染色活的細(xì)胞或組織,染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細(xì)胞或組織,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定,使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。
保存條件: -20℃,避光防潮密閉干燥。
運輸條件:
2~8℃運輸注意事項: 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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