碧云天生產(chǎn)的BL21(DE3)超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞,英文名BL21(DE3) Super Competent Cells,是一種可以用于IPTG誘導(dǎo)下的重組蛋白表達(dá)的E. coli BL21(DE3)即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率可以高達(dá)1×107cfu/μg DNA以上。
BL21適合T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),比如常見的原核表達(dá)載體pET系列[1]。該菌株缺失內(nèi)源性蛋白酶的大腸桿菌B菌株,它能有效避免重組表達(dá)蛋白的降解,廣泛用于重組蛋白的表達(dá)。BL21(DE3)是被λ噬菌體DE3溶原化所得BL21衍生菌株。噬菌體DE3中的T7 RNA聚合酶受到lacUV5啟動(dòng)子控制。外源添加IPTG可以誘導(dǎo)BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的快速表達(dá)。T7 RNA聚合酶進(jìn)而識(shí)別表達(dá)質(zhì)粒載體上的的T7啟動(dòng)子,從而驅(qū)動(dòng)重組蛋白的高效表達(dá)。
BL21(DE3)菌株的基因型為F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3) [2]。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達(dá)量,從而減少重組蛋白的水解,提高表達(dá)產(chǎn)量;hsd基因變異可致菌株細(xì)胞內(nèi)的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失,從而提高PCR產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率;dcm可消除甲基化對(duì)腺嘌呤和胞嘧啶的影響,從而幫助某些外源質(zhì)粒復(fù)制,比如攜帶易受甲基化影響的酶切位點(diǎn)的外源質(zhì)粒。
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