1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng) LNCaP clone FGC
細(xì)胞別稱(chēng) LNCaP-Clone-FGC; LNCaP.FGC; LNCaP-FGC; LNCaP FGC; LNCaPATCC
細(xì)胞背景描述 人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離,該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。LNCaP clone FGC細(xì)胞并不形成一致的單層,而是形成集落,在傳代時(shí)可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。LNCaP clone FGC細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上,不形成匯合,很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細(xì)胞生長(zhǎng)極其緩慢,傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后,多數(shù)LNCaP clone FGC細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離,懸浮在培養(yǎng)基中。收到后,在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24-48小時(shí),以使細(xì)胞再貼壁。此后,可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要,培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)容物可以收集,300g離心15分鐘,以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中。
供體年齡 男;50歲
組織來(lái)源 前列腺;左鎖骨淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類(lèi)型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類(lèi)型 前列腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 2~3分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~32-36 hours
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