細(xì)胞簡(jiǎn)介

人胚腎細(xì)胞株293插入SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。該細(xì)胞最初的名字293tsA1609neo，攜帶SV40復(fù)制序列，被廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。

運(yùn)輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收貨后-80℃冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2．T25瓶培養(yǎng)的細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

培養(yǎng)瓶細(xì)胞接收后的處理

1．收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2．請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。

3．細(xì)胞收貨脫落：293T細(xì)胞貼壁能力弱，收貨如有大面積脫落的細(xì)胞團(tuán)為正?，F(xiàn)象。若細(xì)胞在快遞運(yùn)輸途中因振動(dòng)脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-6 h，讓少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。若仍有脫落聚集的細(xì)胞，則 (1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補(bǔ)加1-5% FBS，促進(jìn)貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；(5) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

4．收貨細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，若細(xì)胞生長(zhǎng)密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中的灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)80%-90%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。

5．運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用合適的新鮮培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

凍存細(xì)胞接收后的處理

收貨后-80℃冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。

細(xì)胞復(fù)蘇：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。將凍存管中細(xì)胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

293T培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1．293T貼壁能力較弱，加液、換液、洗滌時(shí)，須動(dòng)作輕柔，避免用液體直沖細(xì)胞，會(huì)造成細(xì)胞脫落。細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密，過(guò)密細(xì)胞容易脫落，脫落下來(lái)的細(xì)胞可以通過(guò)離心收集，使用胰酶消化后繼續(xù)培養(yǎng)。

2．293T細(xì)胞狀態(tài)直接影響病毒包裝效率。當(dāng)細(xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多、細(xì)胞增殖速度減緩、細(xì)胞貼壁能力非常弱（輕柔換液也能導(dǎo)致細(xì)胞半數(shù)脫落）時(shí)，說(shuō)明細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)大幅降低病毒包裝效率。

3．使用高糖DMEM培養(yǎng)293T，低糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量低的培養(yǎng)基可能影響293T細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。

4．如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁，漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象，請(qǐng)確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO₂濃度。并參考以下培養(yǎng)體系：

① DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用5% CO₂培養(yǎng)箱。

② DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用10% CO₂培養(yǎng)箱。

當(dāng)使用碳酸氫鈉含量高的培養(yǎng)基時(shí)，必須將這些細(xì)胞在10% CO₂中孵育，以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒(méi)有適當(dāng)緩沖時(shí)，293T細(xì)胞雖然可以存活，但將無(wú)法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。

5．培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，若細(xì)胞狀態(tài)好，可省略此步驟。

6．本細(xì)胞僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床治療。

7．請(qǐng)注意無(wú)菌操作，避免污染。