細胞簡介

人胚腎細胞株293插入SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。該細胞最初的名字293tsA1609neo，攜帶SV40復制序列，被廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達和蛋白表達。

運輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運輸，收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2．T25瓶培養(yǎng)的細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

培養(yǎng)瓶細胞接收后的處理

1．收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2．請在顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照，10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。

3．細胞收貨脫落：293T細胞貼壁能力弱，收貨如有大面積脫落的細胞團為正常現(xiàn)象。若細胞在快遞運輸途中因振動脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-6 h，讓少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細胞，則 (1) 收集所有細胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補加1-5% FBS，促進貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；(5) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

4．收貨細胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，若細胞生長密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中的灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達80%-90%以上，可以對細胞進行傳代處理。

5．運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

凍存細胞接收后的處理

收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇。

細胞復蘇：將含有1 mL細胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。將凍存管中細胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

293T培養(yǎng)注意事項

1．293T貼壁能力較弱，加液、換液、洗滌時，須動作輕柔，避免用液體直沖細胞，會造成細胞脫落。細胞生長不能過密，過密細胞容易脫落，脫落下來的細胞可以通過離心收集，使用胰酶消化后繼續(xù)培養(yǎng)。

2．293T細胞狀態(tài)直接影響病毒包裝效率。當細胞傳代次數(shù)過多、細胞增殖速度減緩、細胞貼壁能力非常弱（輕柔換液也能導致細胞半數(shù)脫落）時，說明細胞狀態(tài)不好，會大幅降低病毒包裝效率。

3．使用高糖DMEM培養(yǎng)293T，低糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量低的培養(yǎng)基可能影響293T細胞的生長狀態(tài)。

4．如果發(fā)生293T細胞不貼壁，漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象，請確認所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO₂濃度。并參考以下培養(yǎng)體系：

① DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用5% CO₂培養(yǎng)箱。

② DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用10% CO₂培養(yǎng)箱。

當使用碳酸氫鈉含量高的培養(yǎng)基時，必須將這些細胞在10% CO₂中孵育，以便正確緩沖培養(yǎng)基。當培養(yǎng)基沒有適當緩沖時，293T細胞雖然可以存活，但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。

5．培養(yǎng)時可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，若細胞狀態(tài)好，可省略此步驟。

6．本細胞僅用于科學研究，不得用于臨床治療。

7．請注意無菌操作，避免污染。