細(xì)胞簡介

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于組織工程，細(xì)胞治療和基因治療。江苑生物人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞取自健康足月分娩孕婦的臍帶，擁有強(qiáng)大的自我更新能力并具有多向分化潛能。

方法簡介

江苑生物實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞采用組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為1×10⁶ cells /T25瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

江苑生物實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)測(cè)試，具有的增殖和分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。流式檢測(cè)結(jié)果顯示，HLA-DR、CD34、CD45陰性（<5%）；CD90、CD105、CD73陽性（>90%）。且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、內(nèi)毒素、細(xì)菌、酵母和真菌等。

運(yùn)輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2．T25瓶培養(yǎng)的細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

培養(yǎng)瓶細(xì)胞接收后的處理

1．收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2．請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。

3．細(xì)胞收貨脫落：若細(xì)胞在快遞運(yùn)輸途中因振動(dòng)脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，讓少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細(xì)胞，則 (1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補(bǔ)加1-5% FBS，促進(jìn)貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；(5) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

4．收貨細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，若細(xì)胞生長密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)80%-90%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。

5．運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

凍存細(xì)胞接收后的處理

收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。

細(xì)胞復(fù)蘇：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。將凍存管中細(xì)胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

培養(yǎng)信息

培養(yǎng)基：10% FBS、DMEM/F12、1% Penicillin-Streptomycin

換液頻率：每2-3天換液一次。

組織來源：人臍帶

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)更佳

消化液：0.25%胰蛋白酶，37℃消化2 min左右；1：3-5傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 95%，CO₂ 5%；溫度：37℃

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限，建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)

注意事項(xiàng)

1．本細(xì)胞僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床治療。

2．請(qǐng)注意無菌操作，避免污染。