細胞簡介

臍帶間充質(zhì)干細胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞，廣泛應(yīng)用于組織工程，細胞治療和基因治療。江苑生物人臍帶間質(zhì)干細胞取自健康足月分娩孕婦的臍帶，擁有強大的自我更新能力并具有多向分化潛能。

方法簡介

江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質(zhì)干細胞采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為1×10⁶ cells /T25瓶。

質(zhì)量檢測

江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質(zhì)干細胞經(jīng)測試，具有的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。流式檢測結(jié)果顯示，HLA-DR、CD34、CD45陰性（<5%）；CD90、CD105、CD73陽性（>90%）。且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、內(nèi)毒素、細菌、酵母和真菌等。

運輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運輸，收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2．T25瓶培養(yǎng)的細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

培養(yǎng)瓶細胞接收后的處理

1．收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2．請在顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。

3．細胞收貨脫落：若細胞在快遞運輸途中因振動脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，讓少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細胞，則 (1) 收集所有細胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補加1-5% FBS，促進貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；(5) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

4．收貨細胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，若細胞生長密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達80%-90%以上，可以對細胞進行傳代處理。

5．運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

凍存細胞接收后的處理

收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。

細胞復(fù)蘇：將含有1 mL細胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。將凍存管中細胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

培養(yǎng)信息

培養(yǎng)基：10% FBS、DMEM/F12、1% Penicillin-Streptomycin

換液頻率：每2-3天換液一次。

組織來源：人臍帶

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)更佳

消化液：0.25%胰蛋白酶，37℃消化2 min左右；1：3-5傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 95%，CO₂ 5%；溫度：37℃

人臍帶間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限，建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗

注意事項

1．本細胞僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床治療。

2．請注意無菌操作，避免污染。