英文名稱DiR iodide

中文名稱DiR 碘化物(細(xì)胞膜紅色熒光探針)

別    名1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindotricarbocyanine Iodide; DiR; DiIC18(7);  

保存條件Store at -20℃, protect from light.

產(chǎn)品介紹DiR is a lipophilic carbocyanine near infrared fluorescent dye.

DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng),這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色,這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散,*濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯:DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā),有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長,在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織,在活體成像中用來示蹤。

儲存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。

溶解性:可溶于無水乙醇、DMSO和DMF,其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時(shí)可以適當(dāng)加熱,并用超聲處理以促進(jìn)溶解。

使用方法

1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備

(1)配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。

注意:未使用的儲存液保存在-20 oC,避免反復(fù)凍融。

(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。

注意:工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找*條件。

2. 懸浮細(xì)胞染色

(1)懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。

(2)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時(shí)間不同。

(3)染色細(xì)胞試管在1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。

(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。

(5)重復(fù)(3),(4)步驟兩次以上。

3. 粘壁細(xì)胞的染色

(1)使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

(4)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時(shí)間不同。

(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測

(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

(2)多色染料的同時(shí)檢測,濾光器按照以下設(shè)定:

a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;

b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;

c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀的檢測

DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,FL2,FL3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。