技術(shù)指標(biāo)

　　外觀：白色至淺棕色無定型凍干粉末；蛋白純度：≥90%；比活性≥100U/mg酶粉；過氧化氫酶：≤0.001%；蛋白酶≤0.001%；尿酸酶：≤0.01%；ATP酶：≤0.005%；甘油激酶：≤0.01%；葡萄糖氧化酶：≤0.01%；

　　酶學(xué)性質(zhì)

　　來源：微生物，膽固醇酯酶；分類：EC3.1.1.13；分子量：61kDa(SDS-PAGE)；等電點(diǎn)：5.15；Km值：5.8×10-5MCholesterollinoleate；抑制劑：Ag+；最適：pH5.0；最適溫度：55；pH穩(wěn)定性4.5-9.0(37℃℃,60min)；熱穩(wěn)定性：50℃以下穩(wěn)定(pH7.5,30min)；穩(wěn)定性：-20℃靜置保存12個(gè)月保持90%以上活性；保護(hù)劑:膽酸鈉以及BSA。

　　酶活定義：?jiǎn)挝幻富疃x為在下述條件下，每分鐘催化生成1μmolH2O2所需的酶量。

　　試劑準(zhǔn)備

　　試劑I：0.2M磷酸鉀緩沖液，pH6.0。

　　試劑II：在2.0mL異丙醇中加入39mg膽固醇亞油酸酯，水浴輕微加熱至完全溶解。加入約80mL72-74℃預(yù)熱的1%GenapolX-80，72-74℃水浴并攪拌30min，溶液會(huì)先變澄清后變渾濁。用自來水冷卻溶液至室溫。加入0.6g膽酸鈉，溶解后用1%GenapolX-80溶液定容至100mL。

　　試劑III：1kU/mLPOD。

　　試劑IV：50mMTOOS溶液。

　　試劑V：50mM4-AA溶液。

　　試劑VI：300U/mLCOX酶液。

　　酶稀釋液：20mM磷酸鉀緩沖液，pH6.0，含2mMMgCl2，0.5mMEDTA-Na2和0.2%BSA。

　　操作步驟

　　1.向3mL比色皿中加入2.75mL反應(yīng)混合物。

　　2.加入0.1mL試劑VI，37℃溫浴2min.

　　3.加入0.1mL待測(cè)酶液，混勻。

　　4.37℃反應(yīng)，用分光光度計(jì)在555nm檢測(cè)樣品1min內(nèi)的吸光度變化（ΔAs）