【產(chǎn)品型號】

　　HMD3502，HMD3602-16T，HMD3602-96T。

　　【包裝規(guī)格】

　　100人份、16T/板、96人份/盒。

　　【預(yù)期用途】

　　用于核酸的提取、富集、純化等步驟。其處理后的產(chǎn)物用于臨床體外檢測使用。

　　【檢驗(yàn)原理】

　　本品利用高離液鹽環(huán)境下磁珠對于核酸的特異性吸附能力，將樣品裂解物中的核酸富集，經(jīng)過洗滌清除雜質(zhì)后，在洗脫液中將富集的核酸釋放，達(dá)到核酸純化的目的。

　　【主要組成成分】

　　1.HMD3602-16T，HMD3602-96T各功能組分已預(yù)先分裝于深孔板中，裂解液每人份450μL，清洗液1每人份500μL，清洗液2每人份700μL×2，磁珠每人份600μL，洗脫液每人份50μL。

　　2.HMD3502將對應(yīng)人份量的裂解液（450μL/人份）、清洗液1（500μL/人份）、清洗液2（1400μL/人份）、洗脫液（50μL/人份）、磁珠懸液（50μL/人份）分裝在不同容器中，使用前由操作人員分別取用。

　　3.試劑規(guī)格說明；

　　【儲存條件及有效期】

　　室溫保存。冷凍會大幅降低磁珠性能，在儲存運(yùn)輸中請避免磁珠凍結(jié)。有效期12個月。深孔板開封后，需盡快使用。

　　【適用儀器】

　　奧盛Auto-Pure32A全自動核酸提取儀及同類儀器。

　　【樣本要求】

　　1.本產(chǎn)品適用于鼻咽拭子、唾液、尿液、血漿、血清、細(xì)胞保存液等液體樣本中細(xì)胞及病原體的核酸提取。

　　2.樣本收集后應(yīng)立即放入到可用于核酸檢測的細(xì)胞保存液中固定、保存，并盡快進(jìn)行核酸提取。

　　3.核酸酶會影響本產(chǎn)品的性能。

　　4.唾液樣本：200μL以上唾液樣本取200μL使用，不足200μL，請全部使用。

　　5.干拭子樣本：向裝有拭子頭的樣品管中加入400μLPBS（或采樣拭子配套的樣品儲存液），高速旋混勻2min，瞬離后取200μL使用。

　　6.濕拭子樣本：高速渦旋混勻1min，瞬離后吸取200μL使用（如液體不足200μL可添加適量PBS或采樣拭子配套的樣品儲存液后再進(jìn)行漩渦混勻以及離心操作）。

　　7.其他液體樣本：200μL以上樣本取200μL使用，不足200μL，請全部使用。

　　【檢驗(yàn)方法】

　　見操作步驟。

　　【自備材料】

　　1.核酸自動提取儀（針對自動提取方法，本說明以HMD3602-16T搭配奧盛Auto-Pure32A全自動核酸提取儀為例）。

　　2.96孔深孔板及磁棒套（HMD3502自動提取）。

　　3.磁力架（HMD3502手動提?。?。

　　【準(zhǔn)備工作】

　　1.使用前請將各緩沖液提前從冰箱取出，待恢復(fù)至室溫后使用。

　　2.如裂解液出現(xiàn)少量沉淀，請置于室溫或37℃，待沉淀充分溶解后使用。

　　3.磁珠在每次使用前，必須劇烈搖晃至底部無可見沉淀后方可取用。

　　【操作步驟】

　　HMD3602-16T/HMD3602-96T自動提取

　　1.開封：將深孔板從包裝盒內(nèi)取出，平衡至室溫，小心撕下封口膜，如有液體粘附在深孔板封口膜以及管壁上，將液體甩至底部后再開封。

　　2.加樣：將200μL樣本加入列1、7（HMD3602-16T）或板1（HMD3602-96T），每孔位對應(yīng)一個樣品。注意：開封后請在20分鐘內(nèi)完成加樣操作。

　　3.上機(jī)：按照附表1設(shè)定提取程序。將深孔板放入核酸提取儀，磁棒套插入對應(yīng)槽位，啟動程序。待程序完成后，轉(zhuǎn)移洗脫液至離心管中，把產(chǎn)物保存于-80℃。按標(biāo)準(zhǔn)流程，丟棄廢液和耗材。

　　HMD3502手動提取

　　1.依次將200μL樣品、450μL裂解液加入1.5mL離心管，顛倒混勻，55℃孵育5分鐘。

　　2.添加50μL磁珠，室溫于旋轉(zhuǎn)混勻儀上旋轉(zhuǎn)孵育10分鐘。

　　3.將含有樣品的混合液置于磁力架上，靜置2分鐘（或至裂解液無色透明）。吸出液相丟棄。注意：如果離心管蓋上沾有磁珠，可在靜置過程中將離心管與磁力架一同顛倒3-4次將磁珠洗下。

　　4.去除磁力架，加入500μL清洗液1。顛倒混勻至磁珠完全重懸或用移液器吹打3-4次重懸磁珠。

　　5.將離心管置于磁力架上，靜置1分鐘后棄除上清液。

　　6.去除磁力架，加入700μL清洗液2，重懸磁珠。

　　7.將離心管置于磁力架上，靜置1分鐘后棄除上清液。

　　8.重復(fù)步驟6和步驟7。注意：盡量保證將離心管中殘余液體吸除完全（包括離心管蓋上的殘余液體）。

　　9.將離心管保持于磁力架上，開蓋室溫靜置晾干5分鐘。

　　10.去除磁力架，添加50μL洗脫液，重懸磁珠。55℃孵育5min，孵育期間輕彈離心管2-3次使磁珠分散。

　　11.將離心管置于磁力架上，靜置2分鐘，將包含有洗脫核酸的上清轉(zhuǎn)移入新的離心管中。注意：如果離心管壁上有液體附著，請瞬時離心后再進(jìn)行磁吸操作。

　　12.按要求丟棄實(shí)驗(yàn)廢品廢液，將純化核酸樣品于適宜條件保存或進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

　　【檢驗(yàn)方法的局限性】

　　本產(chǎn)品自動化提取需與核酸自動提取儀配套使用。手動提取需與磁力架配套使用。

　　【注意事項(xiàng)】

　　1.本品僅限于體外診斷使用，不可用于人體或動物內(nèi)服外用。

　　2.提取好的核酸需盡快用于檢測，如果不是馬上檢測的，需將核酸從深孔板中取出，放到無核酸酶的容器內(nèi)，并放置于-20℃下保存。

　　3.在操作過程中，請全程穿戴一次性手套、一次性口罩及實(shí)驗(yàn)服。使用Nuclease-free耗材等，程度避免RNase污染。裂解液與清洗液1中含有異硫氰酸胍或鹽酸胍，會對皮膚及粘膜造成腐蝕，如不慎入眼或接觸，請用大量清水沖洗后就醫(yī)。

　　4.請勿將廢棄液與漂白劑或酸性溶液混合，以免產(chǎn)生有毒揮發(fā)性物質(zhì)。

　　【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

　　1.試劑包裝外觀應(yīng)完好無損、整潔。

　　2.各組分凈含量：不少于標(biāo)示量。

　　3.提取產(chǎn)量：針對100μL~400μL液體樣本進(jìn)行核酸純化，洗脫液產(chǎn)量不少于42μL。

　　4.核酸回收率：對標(biāo)定DNA樣品進(jìn)行核酸純化，回收率大于90%。

　　5.核酸純度：對標(biāo)定DNA樣品進(jìn)行核酸純化，所得產(chǎn)物OD260/OD280在1.7-2.0之間。

　　6.批內(nèi)精密度：使用標(biāo)定的參考品，使用企業(yè)指定的熒光PCR試劑擴(kuò)增提取物得到Ct值，其重復(fù)性誤差CV不大于5％。

　　7.本品提取產(chǎn)物可進(jìn)行PCR等分子生物學(xué)檢測。

　　Eg：200μL濃度為5×103IU/mL的COVID-19假病毒咽拭子樣本，經(jīng)本試劑盒提取，采用COVID-19檢測試劑盒對提取產(chǎn)物進(jìn)行檢測。平行10組實(shí)驗(yàn)，檢出率100%，Ct重現(xiàn)性良好，結(jié)果如圖1所示。對不同濃度COVID-19假病毒咽拭子樣本（5×101IU/mL，5×102IU/mL，5×103IU/mL，5×104IU/mL，5×105IU/mL）提取產(chǎn)物進(jìn)行RT-qPCR檢測，結(jié)果顯示對不同病毒濃度樣本均提取能力良好，且區(qū)分度明顯，對RT-qPCRCt值與假病毒拷貝數(shù)的對數(shù)進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果顯示，提取產(chǎn)物線性度良好。