【產(chǎn)品型號(hào)】
HMD3502,HMD3602-16T,HMD3602-96T。
【包裝規(guī)格】
100人份、16T/板、96人份/盒。
【預(yù)期用途】
用于核酸的提取、富集、純化等步驟。其處理后的產(chǎn)物用于臨床體外檢測(cè)使用。
【檢驗(yàn)原理】
本品利用高離液鹽環(huán)境下磁珠對(duì)于核酸的特異性吸附能力,將樣品裂解物中的核酸富集,經(jīng)過(guò)洗滌清除雜質(zhì)后,在洗脫液中將富集的核酸釋放,達(dá)到核酸純化的目的。
【主要組成成分】
1.HMD3602-16T,HMD3602-96T各功能組分已預(yù)先分裝于深孔板中,裂解液每人份450μL,清洗液1每人份500μL,清洗液2每人份700μL×2,磁珠每人份600μL,洗脫液每人份50μL。
2.HMD3502將對(duì)應(yīng)人份量的裂解液(450μL/人份)、清洗液1(500μL/人份)、清洗液2(1400μL/人份)、洗脫液(50μL/人份)、磁珠懸液(50μL/人份)分裝在不同容器中,使用前由操作人員分別取用。
3.試劑規(guī)格說(shuō)明;
【儲(chǔ)存條件及有效期】
室溫保存。冷凍會(huì)大幅降低磁珠性能,在儲(chǔ)存運(yùn)輸中請(qǐng)避免磁珠凍結(jié)。有效期12個(gè)月。深孔板開(kāi)封后,需盡快使用。
【適用儀器】
奧盛Auto-Pure32A全自動(dòng)核酸提取儀及同類(lèi)儀器。
【樣本要求】
1.本產(chǎn)品適用于鼻咽拭子、唾液、尿液、血漿、血清、細(xì)胞保存液等液體樣本中細(xì)胞及病原體的核酸提取。
2.樣本收集后應(yīng)立即放入到可用于核酸檢測(cè)的細(xì)胞保存液中固定、保存,并盡快進(jìn)行核酸提取。
3.核酸酶會(huì)影響本產(chǎn)品的性能。
4.唾液樣本:200μL以上唾液樣本取200μL使用,不足200μL,請(qǐng)全部使用。
5.干拭子樣本:向裝有拭子頭的樣品管中加入400μLPBS(或采樣拭子配套的樣品儲(chǔ)存液),高速旋混勻2min,瞬離后取200μL使用。
6.濕拭子樣本:高速渦旋混勻1min,瞬離后吸取200μL使用(如液體不足200μL可添加適量PBS或采樣拭子配套的樣品儲(chǔ)存液后再進(jìn)行漩渦混勻以及離心操作)。
7.其他液體樣本:200μL以上樣本取200μL使用,不足200μL,請(qǐng)全部使用。
【檢驗(yàn)方法】
見(jiàn)操作步驟。
【自備材料】
1.核酸自動(dòng)提取儀(針對(duì)自動(dòng)提取方法,本說(shuō)明以HMD3602-16T搭配奧盛Auto-Pure32A全自動(dòng)核酸提取儀為例)。
2.96孔深孔板及磁棒套(HMD3502自動(dòng)提?。?。
3.磁力架(HMD3502手動(dòng)提?。?/p>
【準(zhǔn)備工作】
1.使用前請(qǐng)將各緩沖液提前從冰箱取出,待恢復(fù)至室溫后使用。
2.如裂解液出現(xiàn)少量沉淀,請(qǐng)置于室溫或37℃,待沉淀充分溶解后使用。
3.磁珠在每次使用前,必須劇烈搖晃至底部無(wú)可見(jiàn)沉淀后方可取用。
【操作步驟】
HMD3602-16T/HMD3602-96T自動(dòng)提取
1.開(kāi)封:將深孔板從包裝盒內(nèi)取出,平衡至室溫,小心撕下封口膜,如有液體粘附在深孔板封口膜以及管壁上,將液體甩至底部后再開(kāi)封。
2.加樣:將200μL樣本加入列1、7(HMD3602-16T)或板1(HMD3602-96T),每孔位對(duì)應(yīng)一個(gè)樣品。注意:開(kāi)封后請(qǐng)?jiān)?0分鐘內(nèi)完成加樣操作。
3.上機(jī):按照附表1設(shè)定提取程序。將深孔板放入核酸提取儀,磁棒套插入對(duì)應(yīng)槽位,啟動(dòng)程序。待程序完成后,轉(zhuǎn)移洗脫液至離心管中,把產(chǎn)物保存于-80℃。按標(biāo)準(zhǔn)流程,丟棄廢液和耗材。
HMD3502手動(dòng)提取
1.依次將200μL樣品、450μL裂解液加入1.5mL離心管,顛倒混勻,55℃孵育5分鐘。
2.添加50μL磁珠,室溫于旋轉(zhuǎn)混勻儀上旋轉(zhuǎn)孵育10分鐘。
3.將含有樣品的混合液置于磁力架上,靜置2分鐘(或至裂解液無(wú)色透明)。吸出液相丟棄。注意:如果離心管蓋上沾有磁珠,可在靜置過(guò)程中將離心管與磁力架一同顛倒3-4次將磁珠洗下。
4.去除磁力架,加入500μL清洗液1。顛倒混勻至磁珠完全重懸或用移液器吹打3-4次重懸磁珠。
5.將離心管置于磁力架上,靜置1分鐘后棄除上清液。
6.去除磁力架,加入700μL清洗液2,重懸磁珠。
7.將離心管置于磁力架上,靜置1分鐘后棄除上清液。
8.重復(fù)步驟6和步驟7。注意:盡量保證將離心管中殘余液體吸除完全(包括離心管蓋上的殘余液體)。
9.將離心管保持于磁力架上,開(kāi)蓋室溫靜置晾干5分鐘。
10.去除磁力架,添加50μL洗脫液,重懸磁珠。55℃孵育5min,孵育期間輕彈離心管2-3次使磁珠分散。
11.將離心管置于磁力架上,靜置2分鐘,將包含有洗脫核酸的上清轉(zhuǎn)移入新的離心管中。注意:如果離心管壁上有液體附著,請(qǐng)瞬時(shí)離心后再進(jìn)行磁吸操作。
12.按要求丟棄實(shí)驗(yàn)廢品廢液,將純化核酸樣品于適宜條件保存或進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
本產(chǎn)品自動(dòng)化提取需與核酸自動(dòng)提取儀配套使用。手動(dòng)提取需與磁力架配套使用。
【注意事項(xiàng)】
1.本品僅限于體外診斷使用,不可用于人體或動(dòng)物內(nèi)服外用。
2.提取好的核酸需盡快用于檢測(cè),如果不是馬上檢測(cè)的,需將核酸從深孔板中取出,放到無(wú)核酸酶的容器內(nèi),并放置于-20℃下保存。
3.在操作過(guò)程中,請(qǐng)全程穿戴一次性手套、一次性口罩及實(shí)驗(yàn)服。使用Nuclease-free耗材等,程度避免RNase污染。裂解液與清洗液1中含有異硫氰酸胍或鹽酸胍,會(huì)對(duì)皮膚及粘膜造成腐蝕,如不慎入眼或接觸,請(qǐng)用大量清水沖洗后就醫(yī)。
4.請(qǐng)勿將廢棄液與漂白劑或酸性溶液混合,以免產(chǎn)生有毒揮發(fā)性物質(zhì)。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1.試劑包裝外觀應(yīng)完好無(wú)損、整潔。
2.各組分凈含量:不少于標(biāo)示量。
3.提取產(chǎn)量:針對(duì)100μL~400μL液體樣本進(jìn)行核酸純化,洗脫液產(chǎn)量不少于42μL。
4.核酸回收率:對(duì)標(biāo)定DNA樣品進(jìn)行核酸純化,回收率大于90%。
5.核酸純度:對(duì)標(biāo)定DNA樣品進(jìn)行核酸純化,所得產(chǎn)物OD260/OD280在1.7-2.0之間。
6.批內(nèi)精密度:使用標(biāo)定的參考品,使用企業(yè)指定的熒光PCR試劑擴(kuò)增提取物得到Ct值,其重復(fù)性誤差CV不大于5%。
7.本品提取產(chǎn)物可進(jìn)行PCR等分子生物學(xué)檢測(cè)。
Eg:200μL濃度為5×103IU/mL的COVID-19假病毒咽拭子樣本,經(jīng)本試劑盒提取,采用COVID-19檢測(cè)試劑盒對(duì)提取產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。平行10組實(shí)驗(yàn),檢出率100%,Ct重現(xiàn)性良好,結(jié)果如圖1所示。對(duì)不同濃度COVID-19假病毒咽拭子樣本(5×101IU/mL,5×102IU/mL,5×103IU/mL,5×104IU/mL,5×105IU/mL)提取產(chǎn)物進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè),結(jié)果顯示對(duì)不同病毒濃度樣本均提取能力良好,且區(qū)分度明顯,對(duì)RT-qPCRCt值與假病毒拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸分析,結(jié)果顯示,提取產(chǎn)物線性度良好。
關(guān)鍵字: 病毒DNA/RNA提取試劑盒;快速病毒DNA/RNA提取試劑盒;核酸提取試劑盒;
瀚海新酶生物科技有限公司成立于2015年,是一家專(zhuān)業(yè)從事生物醫(yī)藥、體外診斷核心原料研發(fā)、生產(chǎn)、應(yīng)用和技術(shù)服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè),在上海、武漢、蘇州、青島、宜昌等五地分別設(shè)立研發(fā)生產(chǎn)中心。