酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無(wú)機(jī)磷酸，常見(jiàn)于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
測(cè)定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP催化對(duì)硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定405nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算ACP活性。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、10000g離心10min，取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血液可直接測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
測(cè)定：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 10 | 10 |
試劑一 | 90 | 990 |
試劑二 | 900 |
|
30℃避光保溫30 min |
試劑三 | 400 | 400 |
混勻，吸取 1 mL 加入玻璃比色皿中，405 nm 下測(cè)定各管吸光值。ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。
注意：每個(gè)測(cè)定管需做一個(gè)對(duì)照管。
ACP活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線 y = 14.6672x + 0.0179；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷14.6672 ×V反總÷T÷V樣
= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ACP活性計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反總÷T÷(V樣×Cpr)
=0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)
= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力 (μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V反總÷T ÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）
= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)體系總體積（mL），1 mL； W ：樣品質(zhì)量，g； V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積（mL），0.01 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），30 min；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒注意事項(xiàng)：
ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
關(guān)鍵字： 酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒;酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門(mén)聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。