莽草酸脫氫酶（Shikimate dehydrogenase，SD）試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關鍵酶。
莽草酸脫氫酶（Shikimate dehydrogenase，SD）試劑盒測定原理：
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產生NADPH，檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
莽草酸脫氫酶（Shikimate dehydrogenase，SD）試劑盒測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
（1）在試劑二中加入25mL試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min，現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2）取0.05mL樣本和0.95mL試劑二于1mL比色皿中，混勻，在340 nm波長下立即記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
SD活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V×樣Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘每分鐘產生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
關鍵字： 莽草酸脫氫酶（Shikimate deh;莽草酸脫氫酶（Shikimate deh;
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