還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩＿€原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒測(cè)定原理：
DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
GSH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A1。
4. 測(cè)定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測(cè)定一次。
GSH含量計(jì)算公式：
GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
GSH計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr ）=0.667×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
GSH（μ mol/g鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)
V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒注意事項(xiàng)：
1. 試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。
2. 最低檢出限為0.01mmol/L。
關(guān)鍵字： 還原型谷胱甘肽（reduced glut;還原型谷胱甘肽（reduced glut;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。